石蜡切片实验步骤

石蜡切片实验步骤

1．取材

肝、肠（食道、胃、前肠、中肠、后肠）、肾、精巢、卵巢、肌肉、鳃等组织，长5mm╳5mm╳2mm。用利刀、剪剪切组织块，注意

2．固定

Bouin液：饱和苦味酸水溶液：甲醛（40%）：冰乙酸=15：5：1=75ml饱和苦味酸水溶液+25ml甲醛+5ml冰乙酸。使用前配置。

饱和苦味酸水溶液：100ml蒸馏水+1.2g苦味酸

Bouin液/组织块体积比>100，须常摇动防沉底、粘壁产生固定不均匀现象；避光固定；不同的材料分瓶固定，固定瓶上贴上标签。一般组织固定12-24h。

3．脱水、透明、包埋

70%乙醇（1h）----70%乙醇（1h）----70%乙醇（1h）----80%乙醇（30＇）-----90%乙醇（30＇）---95%乙醇（30＇）----100%乙醇（30＇）----100%乙醇+二甲苯（1：1）（30＇）----二甲苯（30＇）-----二甲苯（30＇）----二甲苯+石蜡（1：1）（60＇，60℃）----石蜡（60＇，60℃）----石蜡（60＇，60℃）----包埋

4、修块

用刀片修块到适当大小，上下左右边平行。

5．切片

6-8微米。

6、粘片（40-50℃水面上，展片后捞片，或直接贴片）

用蛋白甘油（新鲜蛋白25ml+甘油25 ml+0.5g麝香草酚或石炭酸→100 ml量筒中，用力振荡使成泡沫→纱布过滤，储存于玻璃瓶中1-2月；使用原液或用蒸馏水1：1稀释后再用）粘片。

7、烤片50-55℃（2h）

8．染色、封片

二甲苯（10-20＇）----100%乙醇+二甲苯（8-10＇）（1：1）----100%乙醇（8-10＇）----95%乙醇（8-10＇）-----90%乙醇（5-8＇）----80%乙醇（5-8＇）----70%乙醇（5-8＇）----60%乙醇（3-5＇）----50%乙醇（3-5＇） ------40%乙醇（3-5＇）----水（洗净）----苏木精（5-20＇）-----水（洗净）-------70%乙醇（5-8＇）----80%乙醇（5-8＇）----90%乙醇（5-8＇）----95%乙醇（5-8＇）-----伊红（0.2%，2-5＇或25秒，10秒即可）------95%乙醇（5-8＇）------100%乙醇（8-10＇）-----100%乙醇+二甲苯（8-10＇）------二甲苯（8-10＇）----中性树（滴两滴）胶封片。