传递窗紫外灯表面 消毒效果验证
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目 录
1、概述........................................................................................................................................... 4 2、实施日期及时间安排.............................................................................................................. 4 3、验证小组成员 .......................................................................................................................... 4 4、仪器和设备 .............................................................................................................................. 4 5、材料与试剂 .............................................................................................................................. 4 6、验证过程 .................................................................................................................................. 5 7、验证结果记录 .......................................................................................................................... 8 8、再验证周期 .............................................................................................................................. 8 9、相关 SOP ................................................................................................................................. 8 10、QA 职责 ....................................................................................................................................... 8 11、修改事项 ................................................................................................................................ 8 12、文档 ........................................................................................................................................ 8
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1、概述
进入微生物室的物品通过传递窗，经过紫外消毒后进入微生物室。为了确认传递窗紫外灯的消毒效果，特起草本方案对其进行验证。本验证用于 QC 微生物室、无菌室传递窗紫外灯表面消毒效果检查。 2、实施日期及时间安排
2012 年 月 日开始进行验证。 3、验证小组成员
QA QA 负责验证方案的批准 负责验证方案的批准 负责验证方案、验证报告的审核、组织验证方案 的培训和实施 QC 负责验证方案和验证报告的起草 验证方案的实施 4、仪器和设备
仪器名称 净化工作台 菌落计数器 紫外线强度测定仪 稳压器 细菌培养箱 霉菌培养箱 5、器材 5.1 灭菌刻度吸管（1ml，10ml） 5.2 灭菌试管 5.3 灭菌平皿 5.4 酒精灯
5.5 载体：（1.0×1.0cm 的玻片）
型号或规格 HS-1300-V 型 220V SHP-150 型 GNP-9270 型
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6、材料与试剂 6.1 纯化水 6.2 营养琼脂培养基 6.3 改良马丁琼脂培养基 6.4 营养肉汤培养基 6.5 改良马丁培养基
6.6 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 6.7 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501] 6.8 大肠杆菌[CMCC（B）44 102] 6.9 白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
6.10 稀释液（0.1％吐温 80，0.1％蛋白胨溶液） 7、验证过程 7.1 试验环境
试验在洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内进行，全过程严格遵守无菌操作。单向流空气区、工作台面及环境定期按《医药工业洁净室（区） 悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 每次操作开始前，开紫外灯照射 1 小时。 7.2 培养基的制备 7.2.1 营养琼脂培养基
配方：
营养琼脂培养基粉 31.0g 纯化水
配制：
根据需要量称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH 至 7.1±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌 121℃×15 分钟。
1000ml
7.2.2 改良马丁琼脂培养基
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配方：
改良马丁琼脂培养基粉 纯化水 配制：
根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH 至 6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌 115℃×20 分钟。 7.2.3 营养肉汤培养基
配方：
营养肉汤培养基 纯化水
配制：
称取营养肉汤培养基 20 克，加 1000ml 纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌 121℃×15 分钟。 7.2.4 改良马丁培养基
配方：
改良马丁培养基粉 纯化水
配制：
根据需要量称取改良马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解， 调 pH 至 6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌 115℃×20 分钟。
28.0g 1000ml 20g 1000ml
42.0g 1000ml
7.4 方法验证试验 7.4.1 辐照强度测定
7.4.1.1 开启紫外灯 5min 后，用中心波长为 253.7nm 的紫外线强度测定仪在灯管下方
垂直 1m 的中心处测量其辐照度值（uW/cm2）。 7.4.1.2 测量时，电压应稳定在 220V。
7.4.1.3 普通型或低臭氧型直管紫外线灯（30W），在灯管下方垂直 1m 的中心处，新灯
管的辐照度值应≥90 uW/cm2 。使用中的灯管的辐照度值应≥70 uW/cm2 ，低
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于此值者应予更换。 7.4.2 照射剂量
表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到 7.5×103 uW·s/cm2,对金黄色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌应达到 2.53× 104uW·s/cm2。 7.4.2.2 照射剂量计算：
照射剂量（uW·s/cm2 ）＝紫外灯管强度（uW/cm2）×时间（s） 7.4.3 细菌及其芽孢和真菌杀灭效果的测定 7.4.3.1 菌液的制备
接种菌种名称 金黄色葡萄球菌新鲜培养 物 大肠杆菌新鲜培养物 枯草芽孢杆菌新鲜培养物 白色念珠菌新鲜培养物 接种培养基 培养条件 营养肉汤培养基 30～35℃培养 18～24 小时 改良马丁培养基 23～28℃ 培 养 24～48 小 时 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌培养后，将菌液进行活菌计数。 7.4.3.2 将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌悬液，（载体回收菌量达 5
×105～5×106 cfu/片），涂匀，放 37℃培养箱烘干。开启紫外灯 5min 后，将 16个染菌玻片平放于灭菌平皿内，水平放于适当距离照射，于 4 个不同间隔时间 （15min、30 min、45 min、60 min）各取出 4 个染菌玻片，分别投入 4 个盛有5ml 洗脱液试管中，振打 80 次。
7.4.3.3 经适当稀释后，取 1ml 洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，细菌放
30～35℃培养 48 小时作活菌计数，真菌放 23～28℃培养 72 小时作活菌计数。 7.4.3.4 阳性对照，除不做照射处理外，取 4 个染菌玻片，分别投入 4 个盛有 5ml 洗脱
液试管中，振打 80 次。余按 7.4.2.3 同样操作。 7.4.3.5 计算杀灭率
阳性对照回收菌数－试验组回收菌数
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杀灭率（％）＝
阳性对照回收菌数
7.4.3.6 判定标准 8、验证结果记录：
附件 1. 试验菌数量测定原始记录 8、再验证周期
传递窗构造或紫外灯管放置位置发生改变时。 9、相关 SOP
×100％
对指示菌杀灭率≥99.9％判为消毒合格。
文件编号 020141 020143 020342 020343 020344 020377 021267 微生物实验室管理 物品进出微生物检验室 文件名称 微生物检验区的清洁消毒 培养基的配制 细菌的接种、传代和保存 高压灭菌 微生物数量的测定
10、QA 职责
QA 必须参与验证的评审阶段； QA 必须审阅最终报告（包括草案）； QA 审阅者不应是参与实施的其他 QA 人员。 11、修改事项
在实施过程中，如果方案需要修改，必须提交书面的报告，阐述修改的原因，修改的内容，并经过验证小组负责人及 QA 的认可。修改后的方案同先前执行的方案一起归档。12、文档
所有的相关文档都应该保留至少 5 年，这些文档应包括如下内容：
原始方案、修改后的方案（如果有的话）、偏差报告、原始数据、原始报告和最终报告、其中，报告应该包括以下内容：
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记录的原件（或复印件）、测试项目及条款、实验开始和结束的日期、材料和方法描述、出现的偏差描述（如果有的话）、实验结果。
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