染耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分离及耐药分析

染耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分离及耐药分析

【摘要】目的：了解我院icu病区感染.耐亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的分离情况及其耐药性。方法：对2008年1月-2011年12月icu病区分离出的149株铜绿假单胞菌采用vitek2—compact微生物分析系统进行鉴定，药敏试验采用梅里埃公司配套试剂；结果根据clsi规定进行判断，用2-巯基丙酸抑制试验测定金属酶。结果149株铜绿假单胞菌主要来源于痰及支气管灌洗液标本，占85.7%,铜绿假单胞菌中对亚胺培南耐药的为49株，占32.9%，耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星和妥布霉素的耐药率最低，分别为36.7%和38.8%,其次为头孢吡肟和庆大霉素，分别为42.9%和46.9%；耐亚胺培南菌株金属酶的产酶率为18.4%。结论icu病区耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要来源于呼吸道感染，对其他抗生素的敏感率均比较低，应加强监控使用抗生素，控制耐亚胺培南铜绿假单胞菌在院内流行传播。

【关键词】铜绿假单胞菌；亚胺培南；耐药性；金属酶 铜绿假单胞菌是引起院内感染的重要条件致病菌之一，近年来，该菌引起的医院感染不断上升，其耐药性也越来越严重。亚胺培南是碳青酶烯类抗生素，抗菌活性好，是临床治疗革兰阴性杆菌重症感染的首选抗生素。但随着临床上亚胺培南的大量使用，其耐药率也在逐年上升［1］。本文对icu病区分离的149株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分离情况及耐药性进行分析。

1.材料与方法

1.1菌株来源149株耐亚胺培南铜绿假单胞菌分离于本院icu病区2008年1月一2011年12月住院病人的各类标本中，所有菌株均采用法国生物梅里埃公司的vitek2—compact微生物鉴定仪进行鉴定和药敏试验。

1.2药敏试验采用法国生物梅里埃公司的vitek2—compact微生物鉴定仪配套试剂进行药敏试验，结果以clsi标准进行判断，质控菌株为铜绿假单胞菌atcc27853。

1.3金属酶测定试验将0.5麦氏浓度的待测菌液均匀涂布于m一h平皿上，中间贴上30ug头孢他啶纸片，在距纸片2.5cm处贴一空白纸片，加2-巯基丙酸原液2u1,35℃培养24h,若头孢他啶抑菌环在靠近2-巯基丙酸侧有增大者，即为产金属酶株［2］。 2.结果

2.1标本分布：49株耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要来源于呼吸道标本，具体见表1。

2.2药敏结果：49株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对临床常用抗生素的药敏结果，见表2。

2.3金属酶测定结果：9株铜绿假单胞菌试验阳性，阳性率为18.4%。 3.讨论

在医院感染的条件致病菌中，铜绿假单胞菌最为常见，成为icu下呼吸道感染的首要病原菌［3,4］由于碳青酶烯类抗生素拥有抗

菌活性强，抗菌谱广的特点，并且对大多数β-内酰胺酶稳定，是铜绿假单胞菌重症感染治疗的首选药物之一。近年来，临床分离出多重耐药铜绿假单胞菌不断增加，是引起院内暴发流行感染的重要的病原菌，增加了死亡率和延长住院时间。本调查研究显示，icu病区患者中，分离出耐亚胺培南铜绿假单胞菌的标本中痰及支气管灌洗液标本所占的比例达85.7%，这可能与icu呼吸道感染患者病情重、住院时间长和大量使用抗生素有关。

近年来，在医院感染中铜绿假单胞菌引起的感染不断增多，治疗策略也越来越多。有报道称对于重症患者，阶梯和联合治疗可以提高治愈率，降低死亡率。但在抗菌药物选择的压力下，引起该菌的耐药变得越来越严重，并呈现出多重耐药现象［5］。在β-内酰胺类药物中，特别是碳青酶烯类药物如亚胺培南和美罗培南，大量应用于临床，是使其耐药率也在逐年上升［6］的主要原因。本研究显示，在所有分离出的耐亚胺培南铜绿假单胞菌当中，阿米卡星和妥布霉素的耐药率最低，分别为36.7%和38.8%,其次为头孢吡肟和庆大霉素，分别为42.9%和46.9%；头孢他啶、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率高达85%以上，分别为87.8%、98.0%和98.0%；而其他抗生素如环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率均在50%左右，远高于以往报道［7］。另外，该菌对庆大霉素、美罗培南、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南的中介率超过10%，远高于其他抗生素，有产生耐药的趋势，应引起临床高度关注。

随着临床上不断分离出多重耐药的铜绿假单胞菌，特别是耐碳青

酶烯类药物如亚胺培南和美罗培南的铜绿假单胞菌，己引起临床上的关注，其耐药机制也越来越受到重视。有研究显示，由于铜绿假单胞菌本身的诱导性是该菌产生多重耐药的主要原因。碳青酶烯类药物如亚胺培南，是治疗产超广谱β-内酰胺酶(esbls)和ampc酶细菌的主要药物之一。由于亚胺培南在临床的大量使用，又因其是β-内酰胺酶的一种强诱导剂，易使该菌产生各种诱导酶和金属酶，引起外膜孔蛋白oprd2的缺失，同时还有反泵机制(effluxsystern)的作用，这些耐药机制是铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物产生耐药的主要原因。本文只检测了耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶的产生情况，其产酶率为18.4%,高于以往报道［8］这可能与本文检侧的铜绿假单胞菌耐药性比较高有关。金属酶对常用的酶抑制剂如克拉维酸、他唑巴坦、舒巴坦敏感性较差，可以水解亚胺培南、美罗培南等碳青酶烯类抗生素。根据bush-jacoby-medeiros分类法，按照水解底物的不同金属酶又分为3组亚群:3a,3b,3c。铜绿假单胞菌产的金属酶属于3a组，该组金属酶作用底物最广，可水解青霉素类、头孢菌素类和碳青酶烯类。所以，铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因是细菌外膜通透性降低特别是oprd2蛋白的缺失，其次是其产生的金属酶对β-内酰胺酶的水解作用。两种机制共同作用使铜绿假单胞菌的多产生多重耐药。因此，准确地检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制，不仅可以帮助临床合理选用抗菌药物并可减少细菌耐药菌株的传播，临床医生应根据微生物室提供的细菌药物敏感实验结果合理选择用药。