２０１０年第１９卷第１６期 药物鉴定 高效液相色谱法测定果糖氯化钠注射液与５一羟甲基糠醛的含量 温利民，牛万刚，邓良平 （扬子江药业集团有限公司，江苏泰州 ２２５３２１） 摘要：目的建立测定果糖氯化钠注射液与５一羟甲基糠醛含量的高效液相色谱法。方法以磺酸型聚苯乙烯与二乙烯苯共聚体阳离子交换 树脂Ｈ型为固定相，流动相为Ｏ．０４ ｍｏｌ／Ｌ磷酸溶液一０．１％枸橼酸溶液一甲醇（４８：４３：９），流速为０．４ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ ｎｍ，柱温 为５０℃。结果果糖进样量在１．６７～５０ ｇ／Ｌ范围内，５一羟甲基糠醛进样量在１．０～２０．０ ｍｇ／Ｌ范围内与峰面积呈良好的线性关系。结论 该方法简便、灵敏、准确、重现性好，且果糖、氯化钠与５一羟甲基糠醛均分离良好，可用于该产品的质量控制。 关键词：果糖氯化钠注射液；５一羟甲基糠醛；高效液相色谱法；含量测定 中图分类号：Ｒ９２７．２；Ｒ９７７．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１０）１６—００２１—０２ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｎｄ ５－—Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌ Ｉｎ Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｌｎ Ｈ ｉｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＰＬＣ．Ｗｅｎ Ｌｉｍｉｎ Ｎｉｕ Ｗａｎｇａｎｇ Ｄｅｎｇ Ｌｉａｎｇｐｉｎｇ ， ， ｛Ｙａｎｇｚｔｅ Ｒｉｖｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌ￡ｄ．，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ ２２５３２１） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｎｄ ５一ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌ ｉｎ Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ｓｕｌｏｎａｔｆｅｄ ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ ａｎｄ ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｅｎｚｅｎｅ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ Ｈ ｔｙｐｅ ｃａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｒｅｓｉｎ．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ０．０４ ｍｏｌ／Ｌ Ｈ３Ｐ０４—０．１％ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ—ｍｅｔｈａｎｏｌ（４８：４３：９）ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．４ ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２５０ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ １．６７—５０ ｇ／Ｌ ｆｏｒ ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ １．０—２０．０ ｍｇ／Ｌ ｆｏｒ ５一ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａ１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｃｃｕｒａｔｅ．ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｆｒｕｃｔｏｓｅ． ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｎｄ５一ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌ ｃａｎ ｂｅ ｗｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ｉｎｊｅｅｔｉｏｎ；５一ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌ；ＨＰＬＣ；ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 果糖氯化钠注射液是一种能量和体液补充剂，果糖比葡萄糖更 易形成糖原，迅速转化为能量。目前果糖氯化钠的检测方法主要有 旋光法和滴定法测定果糖、氯化钠的含量，药品标准中５一羟甲基糠 醛的检测方法为紫外分光光度法“Ｉ，不够准确。为更好地控制果糖 氯化钠注射液的质量，本试验建立了测定果糖氯化钠注射液含量及 检测５一羟甲基糠醛的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法 。 ，现报道如下。 １ 仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ １２００型液相色谱系统；Ｘ５２０５型电子天平（Ｍｅｔｔｌｅ Ｔｏｌｅ— ｄｏ）；Ｇ２Ｘ—ＧＦ１０１一ＭＢＳ型电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械 厂）。果糖对照品（江苏正大丰海制药有限公司，批号为０９０２０５０）； 氯化钠对照品（英国，批号为１２１０５０１３２７０６２２０）；果糖氯化钠注射 液（自制，规格为２５０ ｍＬ：果糖１２．５ ｇ：氯化钠２．２５ ｇ）；５一羟甲基 Ｈ型；流动相：０．０４ ｍｏｌ／Ｌ磷酸溶液一０．１％枸橼酸溶液一甲醇（４８： ４３：９）；检测波长：２５０ ｎｍ；柱温：５０℃；流速：０．４ ｍＬ／ｍｉｎ；进样体 积：２０ ｐ．Ｌ。理论塔板数按氯化钠峰计算不低于２ ５００，各峰之间分 离良好。 ２．２ 溶液制备 取１，２一丙二醇１５ ｍＬ，用流动相稀释至１００ｍＬ，摇匀，即得内 标溶液。分别取经１１０℃干燥至恒重的氯化钠对照品约０．２２５ ｇ， ７０℃减压干燥４ ｈ以上的果糖对照品约１．２５ ｇ，５一羟甲基糠醛 对照品０．０５ ｍｇ，置２５ ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成 每１ ｍＬ中分别含９ ｍｇ，５０ ｍｇ，２ ｇ溶液，即分别为氯化钠、果 糖、５一羟甲基糠醛的对照品溶液。精密量取此溶液５ ｍＬ与内标 １０ ｍＬ，置１００ ｍＬ量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀，即得供试品 溶液。 ２．３ 测定方法 糠醛对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱醇，水为自制 纯化水。 ２ 方法与结果 ２．１ 色谱条件 精密量取对照品溶液和供试品溶液各２０ Ｌ，注入液相色谱 仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算。高效液相色谱图见图１及 图２。 填充剂：磺酸型聚苯乙烯与二乙烯苯共聚体阳离子交换树脂 富硒中药材的市场开发前景广阔。更有资料显示，约２／３的人群处 社 １９９８：５２６． 于亚健康状态，这为“药食同源”药材的富硒保健功能性产品开发 提供了依据。富硒中药材的开发研究，属于众多学科的边缘学科， ［２］张兴国，梅紫青，雒昆利，等．富硒中药材应作为中国的特种药材加以开 发利用——从硒的生物地球化学分布看富硒中药材…．世界元素医学， ２００５，１２（１）：１３—１９． 需要地理学、植物学、医药学、化学、生物工程学等多学科联合攻 关，共同开发富硒中药材资源，造福于人类社会。 作者简介：可成友（１９５８一），男，教授，博士，主要从事药用植 物的研究工作，（电子信箱）Ｋｅ＿ｃｈｅｎｇｙｏｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎ。 参考文献： ［１］黄泰康．常用中药成分与药理手册［Ｍ］．北京：中国中医药科技出版 ［３］杨光圻．人体硒需要量研究［Ｊ］．中国地方病学杂志，１９８９，８（５）： ２９８—３０２． ［４］陈 清．微量元素与健康［Ｍ】．北京：北京大学出版社，１９８９：１７２． ［５］陈 铭，刘更另．高等植物的硒营养及食物链中的作用（二）［Ｊ］．土壤 通报，１９９６，２７（４）：１８５—１８８． （收稿日期：２００９—０７—１０） ・中国药业Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２１・ 药物鉴定 ２．４．５ 重现性试验 ２０１０年第ｌ９卷第ｌ６期 取同一批样品６份，依法制备供试品溶渡并测定含量。结果果 ｉ ：一 ：：；：： ！ ： Ｃ ｔ／ｍｉｎ ２Ｏ 糖含量为９９．１％，ＲＳＤ＝０．１％；氯化钠含量为９８．７％，ＲＳＤ＝ ０．２％；５一羟甲基糠醛含量为９８％，ＲＳＤ＝０．５５％。表明方法的重 现性较好。 ２．４．６ 加样回收试验 １５ Ａ Ｂ Ａ．氯化钠对照品溶液 Ｂ．果糖对照品溶液 Ｃ．５一羟甲基糠醛对照品溶液 图１ 对照品溶液高效液相色谱图 按８０％，１００％，１２０％３个不同浓度，精密称取果糖原料９份， 按处方比例称取适量氯化钠原料、５一羟甲基糠醛，照２．２及２．３ 项下测定，９份样品平均回收率为９９．１％，ＲＳＤ＝０．１％；按８０％， ２ ４ 方法学考察 “ １００％，１２０％３个不同浓度，精密称取氯化钠原料９份，按处方比 ２．４．１ 破坏试验 分别将加热破坏（取本 品，置８Ｏ℃水浴中加热８ ｈ， 冷却）、酸破坏（取本品适 量，加盐酸调ｐＨ小于２，放 ６ｎ ｊ ６ 内标 称取适量果糖原料、５一羟甲基糠醛，照２．２及２．３项下测定，９份 ｏ ｊ ． ．Ｊ ． ． ．△． ／ ｉ ０ ０ 。 。 图２ 果糖氯化钠注射液高效液相 色谱图 样品平均回收率为９８．９％，ＲＳＤ：０．２％；按８０％，１００％，１２０％３个 不同浓度，精密称取５一羟甲基糠醛９份，按处方比称取适量果糖、 氯化钠原料，照２．２及２．３项下测定，９份样品平均回收率为 ９９．１％。ＲＳＤ＝０．５％。 置８ ｈ，加氢氧化钠溶液调ｐＨ至中性）、光照破坏（取本品，强光照 射８ ｈ）的样品溶液，用流动相配制成质量浓度为５０ ｇ／Ｌ的溶液，按 ２．５ 样品含量测定 取６批样品，按拟订的色谱条件进行测定。结果见表１。 表１ 样品含量测定结果 ２．１项下色谱条件进行测定。结果显示，本品经酸、光照、高温破坏 后，都有降解产物产生，所产生的杂质与果糖分离度良好，因此本 条件可很好地检测果糖氯化钠注射液中的果糖含量。 ２．４．２ 线性关系考察 果糖：精密称取果糖对照品ｌ２．５ ｇ，置２５０ ｍＬ量瓶中，加流动 相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取对 照品贮备液０．３，３．０，５．０，８．０，１０．０ ｍＬ，置１０ ｍＬ量瓶中，加流动 相稀释至刻度。按２．Ｉ项下色谱条件进行分析，以进样量（ ｇ）的常 用对数为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程ｌ，＝ １５．２４０ １ Ｘ＋１２．０３６ ９，ｒ＝０．９９９ ６（ｎ＝５）。结果表明果糖进样量在 １．６７～５０ ｇ／Ｌ范围内与峰面积呈良好的线性关系。 氯化钠：精密称取氯化钠对照品２．２５ ｇ，置２５０ ｍＬ量瓶中， ３ 讨论 加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密 量取对照品贮备液０．３，３．０，５．０，８．０，１０．０ ｍＬ，置１０ ｍＬ量瓶 文中拟订的色谱条件合理，得到了理想的峰形及分离度。采用 ＨＰＬＣ法准确、方便，且可同时测定果糖、氯化钠、５一羟甲基糠醛的 含量，方法新颖，实用性较强，对于保证产品质量有着非常重要的 意义。 中，加流动相稀释至刻度。按２．１项下色谱条件进行分析，以进样 量（ ｇ）的常用对数为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得 回归方程Ｙ：１２１．３２５ ６Ｘ＋２１．８９５ ７，ｒ：０．９９９ ７（ｎ＝５）。结果表 参考文献： ［１】国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）［Ｍ】．北京：化学．Ｔ－业 出版社。２００５：６８—６９． 明氯化钠进样量在０．３～９ ｇ／Ｌ范围内与峰面积呈良好的线性关 系。 ５一羟甲基糠醛：精密称取５一羟甲基糠醛对照品１０ ｍｇ，置 【２】Ｗｏｌｓｏｎ ＪＢ，Ｈｅａｄｌｅｅ ＭＥ Ｈｕｉｓｍａｎ ＴＩ－ＩＪ．Ａ ｎｅｗ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ ｐｈｉｃ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ １００ ｍＬ量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品 贮备液。分别精密量取对照品贮备液ｌ，５，１０，１５，２０ ｍＬ，置１００ ｍＬ 量瓶中，加流动相稀释至刻度。按２．１项下色谱条件进行分析，以 进样质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归 ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ ａｎｄ ｎｅｗｂｏｒｍ ｂａｂｉｅｓ［Ｊ】．Ｊ Ｌａｂ Ｃ／ｉｎ Ｍｅｄ，１９８３ （１０２）：１７４—１８５． ［３］Ｓｈａｐｉｒａ Ｅ，Ｍｉｌｌｅｒ ＶＬ，Ｍｉｌｌｅｒ ＪＢ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｃｋｌｅ ｃｅｌｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ａ ｒａｐｉｄ ａｕ— 方程Ａ＝１６３．２５６×Ｃ ｘ１０ ＋２０６ ５８４，ｒ＝０．９９９ ２（ｎ＝５）。结果表 ｔｏｍａｔｅｄ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ】．Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，１９８９（１８２）：３０１—３０８． ［４］Ｐａｐａｄｅａ Ｃ，Ｃａｔｅ ＪＣ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ Ａ，Ｆ，Ｓ ａｎｄ Ｃ ｂｙ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｃｈｒｏｍａｔ０ｇｒａｐｈｙ［Ｊ】．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１９９６（４２）：５７—６３． 明５一羟甲基糠醛进样质量浓度在１．０—２０．０ ｍｇ／Ｌ范围内与峰面 积呈良好的线性关系。 ２．４．３ 精密度试验 ［５］Ｋｕｔｌａｒ Ａ，Ｋｕｔｌａｒ Ｆ，Ｗｉｌｓｏｎ ＪＢ。ｅｔ ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｃａｔｉｏｎ—ｅｘｃｈａｎｇｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒ０ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ｉｔｓ ｕｓｅ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｖａｒｉ— 取果糖、氯化钠、５一羟甲基糠醛对照品溶液（２．３项下溶液）， 连续进样６次，依法测定。结果果糖、氯化钠、５一羟甲基糠醛的 ＲＳＤ分别为０．６５％，０．３５％，０．６５％。 ２．４．４ 稳定性试验 ａｎｔｓ［Ｊ］．Ａｍ ＪＨｅｍａｔｏｌ，１９８４（１７）：３９—５３． ［６］胡云明，张康，于华生．高效液相色谱法测定注射用硫酸妥布霉素的 含量【Ｊ１．海峡药学，２００２，１４（５）：５６—５７． ［７］王巍，刘珂，赵颖．ＨＰＬＣ—ＥＬＳＤ法测定硫酸妥布霉素氯化钠注射 液的含量【Ｊ】．中国药事，２００９，２３（５）：４６１—４６３． 分别取果糖氯化钠注射液、５一羟甲基糠醛供试品溶液，于０， １，２，４，６，８ ｈ时分别进样测定。结果果糖、氯化钠、５一羟甲基糠醛 的峰面积无明显变化，ＲＳＤ分别为０．１％，０．２％，０．６％。 ・（收稿日期：２００９—１１—２４） 、２２・ 中国药业Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ