高效液相色谱法测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量

取黄芪250g，用60%的乙醇，分别以12倍量，10倍量，10倍量提取三次，每次1.5小时。精制的药液在旋转蒸发仪中，旋转蒸干乙醇，将浓缩药液置于已干燥至恒重且称重的2号蒸发皿中,水浴蒸干,置烘箱中干燥3h(105℃),取出,置于干燥器中放置30min,称重，并记录重量。

2号蒸发皿重：213.9g，皿与药物总重：304.7g，提取药材：90.8g 测定黄芪药粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为1790.35μg/g。 含量测定方法与结果： 仪器：美国SSI高效液相色谱仪

色谱柱：BonChrom-c18,4.6*250mm,5μg,100A

流动相：乙腈：水：甲酸=17：83：0.4；检测波长：260nm;流速:1ml/min;进样量:20ul；柱温:常温。

对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品约1.15mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加流动相制成每lml含46μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：

取提取的黄芪细粉（过80目)约0.025g ,精密称定，置5ml量瓶中,加流动相至刻度,超声10min，摇匀,取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液，分别配制成含毛蕊异黄酮葡萄糖苷2.76，

4.6，9.2，18.4，36.8，46μg/ml 的标准溶液,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液按上述色谱条件分析。以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X)作图。毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度在2.76-46mg/L间与峰面积有良好的线性关系。回归方程y=41784x-694.99(r=0.9992,n=6)。 精密度试验

取9.2μg/ml毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液 , 按上述色谱条件连续进样5次,测得阿魏酸的峰面积的RSD为0.46%。结果表明本法精密度良好。

峰面积（mvo/ts） 平均值

417389 415344 418197 419690 420138 稳定性试验

取含量测定的溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h 进行测定，得出毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.15%。结果表明,在室温条件下,供试品溶液12h内稳定性良好。

418151.6

RSD %（n=5)

0.46%

峰面积（mvo/ts） 平均值

374750 377540 383793

378362.2

373160 383275 377655 重现性试验

RSD %（n=6)

1.15%

取黄芪约 0.025 g ,6份,精密称定,按上述方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下吸取供试液20μl, 进样分析并计算含量。得到含量平均值为1790.35μg/g。 样品质量（g）

0.0251 0.0249 0.0253 0.0247 0.0252 0.0252 回收率试验

取6份已知含量的黄芪药粉0.025 g,精密称定,分别置5ml量瓶中 , 精密加入46ug的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加流动相至刻度，按供试品溶液制备方法操作，并测定含量，计算回收率。见以下表格。

峰面积 374750 370277 367105 372956 380628 380232

含量(μg/g) 1789.92 1782.80 1739.61 1810.21 1810.72 1808.84

1.54% RSD%

加入毛蕊

样品质量/g

异黄酮葡萄糖苷量/μg

0.02644 0.02783 0.02572 0.02703 0.02700 0.02591

测定结果

回收率/%

/μg

平均回收 率/%

RSD/% (n =6)

46 46 46 46 46 46

94.19 96.79 92.75 93.89 93.77 93.82

101.86% 102.10% 101.53%

101.05%

98.91% 98.77% 103.12%

1.77%

毛蕊异黄酮葡萄糖苷样品

毛蕊异黄酮葡萄糖苷标品

阴性对照