感受态细胞的制作（RbCl）法
将菌（DH5α）划于LB平板，37℃ 10-12h
排单克隆于30mlSOB，37℃ O/N
取8ml过夜菌至200mlSOB（1000ml三角瓶）37℃至OD500=0.35，约1h
将菌迅速致冷于盐冰浴上15min，同时预冷50ml离心管
将菌分入4*50ml离心管中
预冷离心机
4000rpm*5min J-200 4℃ 弃上清
加入4*16ml buffer 1，轻混，on ice，for 15min
4800rpm*5min，4℃ 弃上清
加4*4ml buffer 2，悬浮细胞，on ice
立即分装，100ul/管（管需预冷，无菌室操作）
既Competent cell 倒入液氮
-70℃保存
试剂
SOB（1升）
Bacto-tryptone 20g
Bacto-yeast extract 5g
NaCl 0.6g
KCl 0.5g
灭菌，用前加入灭菌的1M MgCl2 to 10mM
加入灭菌的1M MgSO4 to 10mM
Buffer 1（1升）
RbCl 1.2g
MnCl2·4H2O 9.9g
CaCl2·2H2O 1.5g
Glycerol 150g
KAC 30ml of 1M stock PH7.5
0.2M HAc调至PH5.8
过滤除菌，4℃保存
Buffer 2（1升）
Mops 20ml of 0.5M stock PH6.8
RbCl 1.2g
CaCl2·2H2O 11g
Glycerol 150g
KOH调至PH6.5
过滤除菌，4℃保存
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