MCF-7细胞

人乳腺癌细胞 MCF—7 细胞描述： MCF-7细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性，包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物（domes）。 该细胞含有Tx-4癌基因。 肿瘤坏死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF—7细胞的生长。 抗雌激素处理细胞能调变IGFBP’S的分泌. MCF—7细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素.请按照正确的培养方法来解冻、传代,以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行. 货号 C0040 质量控制: 本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体. 培养条件： 37℃,5% CO2，PH值7.2～7.4，无菌恒温培养。 细胞相关操作（注意:细胞操作都需严格按照无菌操作） 收到复苏好的贴壁细胞的处理方法： 1. 先从外包装盒拿出细胞瓶,在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜； 2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌,请立即拍照，并将细胞丢掉； 3。 将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养4—6小时； 4。 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基; 5. 重新将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养过夜； 6. 第二天传代。 收到冻存细胞的处理方法： 1.37°C水浴预热培养基;迅速搅动 2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）； 规格 1×106个/管 培养基 DMEM+10% FBS 运输 干冰运输 保存 液氮保存 3。在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min； 4。弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀;

5。置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧); 6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养. 细胞传代

1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代； 2。37°C水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞； 4。显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化； 5。用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散； 6。将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；

7。弃上清，加入15—20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间）,细胞密度在1×104 cells/cm2 (2。5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；

8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。 细胞冻存

1。37°C水浴预热培养基； 2.消化细胞后给细胞计数：

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区;

2）充分混匀细胞，取少量（0。1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合,移液器吹吸混合均匀,用移液器取20ul混合液从盖玻片两端（与中间凹槽平行的两端）分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳; 3）显微镜下，数四个计数区的总细胞数,无活性细胞染成蓝色,活细胞不被染色； 4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2;

这里10000是不变的,因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3计数池内，1cm3=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。 5）细胞活性=活细胞数/细胞总数×100％。

注：细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。 3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。 4。在超净台中将要冻存的细胞移入离心管,1000rpm离心5min。

5。弃上清，用90%培养液+10％DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。 6。将细胞悬液分装到冻存管中(1—1。5ml/管）。

7。将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，—20°C放1-2h后，—80°C过夜，然后快速转移到液氮中。