中药复方_益糖康_抗糖尿病大鼠DNA损伤的实验研究

ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine20021Vol.8.No.10

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【实验研究】

中药复方“益糖康”抗糖尿病大鼠DNA损伤的实验研究

刘　鹏,曹　魏,岳志军,杜文斌,石　岩惠秀娟

(11辽宁中医学院,辽宁沈阳　110032;21辽宁大学,辽宁沈阳　110032)

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　　摘　要:目的:通过动物实验研究中药复方“益糖康”对糖尿病DNA损伤的防护作用。方法:

应用单细胞凝胶电泳(SingleCellGelElectrophoresis,SCGE)技术检测糖尿病大鼠血中淋巴细胞单链断裂的程度,通过荧光显像的方法观察并测量其拖尾长度。结果:正常组大鼠荧光显像无拖尾现象,中药组与造模组糖尿病大鼠荧光显像均有拖尾现象,两组拖尾长度比较有显著差异P<0105,

μμ中药组:15152±4110m;造模组27163±7127m。结论:中药复方“益糖康”对糖尿病大鼠DNA损伤有防护作用。

　　关键词:益糖康;糖尿病;DNA损伤;单细胞凝胶电泳　　中图分类号:R28515　　文献标识码:B　　文章编号:100623250(2002)1020015202

ExperimentalStudyoftheTraditionalChineseMedicine“YiTangKang”PreventingfromorRepairingtheDiabeticMouse’DNADamage

LIUPeng,CAOWei,YUEZhi2jun,etal.

(TheCollageofLiaoningTraditionalChineseMedicine,Shenyang110032,China)

　　Abstract:Ojbective:TodetecttheactionofthetraditionalChinesemedicines“YiTangKang”tothediabeticmouse’sDNAdamage.Method:DNAdamagewasdetectedbysinglecellgelelectrophoresiscometassayinlymphocytes.Result:Thestudyshowedthatnormalmousehasnocometlengthandthecomparisonofthecometlengthbetweenthegroupof“YiTangKang”andthegroupofmodulehassignificance.(P<0.05,thegroupof“YiTangKang”:15.52±

μμ4110m;thegroupofmodule:27.63±7.27m).ThetraditionalChinesemedicines“YiTangKang”canpreventfromorrepairthediabeticmouse’DNAdamage.

Keywords:YiTangKang;diabetes;DNAdamage;singlecellgelelectrophoresis

　　近年来,随着分子生物学的深入发展,糖尿病(DM)的病因与治疗的研究已有了新的进展。本实验旨在从中医整体观念的角度,运用单细胞凝胶电泳的方法,研究中药复方对糖尿病大鼠DNA损伤的防护作用。

材料与方法

1　动物模型的建立

Wistar大鼠25只,雌性,体重300g～380g,除5只作为正常组大鼠外,其余给予链脲佐菌素(STZ,临用前以无菌枸橼酸2枸橼酸钠缓冲液配制成2%的溶

[1]

液,pH=412)50mgΠkg体重单剂腹腔注射。1周后测血糖超过1617mmolΠL者作为糖尿病模型鼠,成模后的大鼠分为2组,造模组8只,中药组9只。

2　药物干预治疗

中药组大鼠给予中药复方“益糖康”煎剂(主要

成分:红参、黄芪、丹参、三七、慈菇等),每日1次灌胃;造模组大鼠给予同体积生理盐水灌胃,共12周。

[2]

3　单细胞凝胶电泳法检测DNA损害311　淋巴细胞提取

在3ml的大鼠淋巴细胞提取液中加入等体积以生理盐水1∶1稀释后的大鼠抗凝血,室温2000rΠmin离心18min,吸取淋巴细胞层,以生理盐水洗涤2次后,放入37℃的恒温箱中备用。

312　制片

μ在磨沙载玻片上滴加100lPBS液配制的

015%正常溶点琼脂糖凝胶,加盖玻片做第一层,大

μ约10min待胶凝固后,揭去盖玻片,滴加第二层75l

含细胞的015%低溶点琼脂糖(含细胞数1000～

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2002年第8卷第10期

ChineseJournalofBasicMedicineinTraditionalChineseMedicine20021Vol.8.No.10

中国中医基础医学杂志

10000),盖上盖玻片,待其凝固后再照上法滴加第三

μ层100l015%低溶点琼脂糖做第三层。

313　裂解

取下盖玻片,将凝胶玻片浸入新鲜配制的冷裂解液中(2.5mmolΠLNaCl10mmolΠLTris100mmolΠLNa22EDTApH=10,用前加入1%Tristonx2100和10%DMSO),裂解1h。

314　电泳

分子生物学的广泛开展,在90年代后期才被国外少

数学者重视的一个研究领域。而目前国内外关于糖尿病的分子生物学研究多从糖尿病的遗传和病因学着手,关于糖尿病DNA损伤的预防和修复的研究开展较少,尤其中医药对糖尿病DNA损伤的防护作用尚未见文献报道。

ThecomparetionbetweenthegroupoftreatmentwithtraditionalChinesemedicinesandthegroupofmodule

IndependentSamplesTest

Levene’sTestforEqualityofVariances

F1.439

Sig.0.249

t4.299

t2testforEqualityofMeans

df15

Sig.(22tailed)

0.001

3

裂解后凝胶玻片置于水平电泳槽内,电泳缓冲

液(300mmolΠLNaCl1mmolΠLNa22EDTApH=13)盖过胶面约215mm,静置40min充分解旋。之后在25V、300mA的条件下电泳40min。

315　染色和观察以014mmolΠL中性Tris漂洗3次,每次5min,然

μμ后滴加300l5gΠml溴乙淀染色15min,放置4℃避光保存。在倒置荧光显微镜下观察,用目镜测微尺

测得的最近端(阴极)到最远端(阳极)荧光影像的距离,即可反映出DNA单链断裂的程度。

结果

正常组大鼠荧光显像无拖尾现象(如图A所示),中药组与造模组大鼠荧光显像均有拖尾现象发生(中药组如图B所示,造模组如图C所示)。2组的测量结果用SPSS软件做进一步分析,如下表所示。

μ　　注:3P<0105;中药组:15152±4.10m;造模组:27163±μ7127m

中医学认为,糖尿病及其各种慢性并发症产生的基本病机是阴阳俱虚,血脉瘀滞。治疗当以平补阴阳、活血化瘀为主。另有文献报道,中药肉苁[3][4][5][6]蓉、山慈菇、人参、枸杞子等有抗DNA损伤的作用。我们在以前的研究中也发现,补肾益精、健脾益气等补益药具有抗DNA损伤作用。因此,我们应用补益药、活血化瘀药等组成中药复方“益糖康”作为本实验的治疗用药。经本实验研究发现,中药复方“益糖康”确有抗糖尿病DNA损伤的作用。

[

参考文献]

[1]　赵凌云,等.链脲佐菌素实验性糖尿病研究Ⅰ.链脲佐

菌素诱发大鼠糖尿病模型[J].四川医学院学报,

1985,16(4):2892291.

[2]　SinghNpetal.ExpCellRes,1988,175:184.

[3]　王晓雯,等.肉苁蓉总苷体外清除自由基及对OH・引

发的DNA损伤的保护作用[J].中国药学杂志,2001,

36(1):29232.

[4]　吴小南,等.慈菇对小鼠抗氧化和DNA修复能力作用

的探讨[J].食品科学,2000,21(6):51254.

[5]　杨晓林.人参总甙及蜂王浆抗化学物所致DNA损伤

作用初探[J].北京医科大学学报,1990,(1):75.

[6]　润玲,等.口服枸杞子对人DNA修复能力的影响[J].

山西中医,2000,16(5):52253.

其结果显示,中药组与造模组大鼠荧光显像的

施尾长度有显著性差异(P<0105)。因此我们有理由相信,中药复方“益糖康”对糖尿病大鼠DNA损伤有防护作用。

讨论

糖尿病DNA损伤同糖尿病慢性并发症(DCCDiabeticChronicComplications)的相关性研究是随着

收稿日期:2001210226　修回日期:2002205221△指导教师

作者简介:刘鹏,男,辽宁沈阳人,医学硕士,从事中西医结合治疗糖尿病研究。