Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第７期 １１ 单核细胞增生性李斯特菌分离株 的生物学特性研究 吴晓薇 一，徐成刚１，３，张朝冠 ，江经纬 ，叶贺佳 ，区燕宜 ，徐小芹 。，廖 明 。 （１．华南农业大学兽医学院，广东广州５１０６４２；２．广东检验检疫技术中心，广东广州５１０６２３； ３．广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广东广州５１０６４２；４．南海出入境检验检疫局，广东佛山５２８２００） 摘要：对从广州禽产品分离的６株ＬＭ进行了药敏试验、ｐＨ值的适应范围、动物致病性等生物学特性研究。６株ＬＭ分 离株对先锋必、氯霉素、卡那霉素、头孢唑啉、庆大霉素等多种药物敏感；而对多黏菌素Ｂ、复方新诺明、新生霉素有耐药性。 ＬＭ分离株在ｐＨ值４．Ｏ～１０．５范围内可存活。以１０。ＣＦＵ剂量感染ＳＰＦ小鼠、清洁级新西兰兔和健康粤黄鸡，小鼠的致死 率达１００ ，可引起兔结膜炎等症状，但未引起试验鸡的任何不适。６株ＬＭ分离株的Ｈｌｙ基因与标准参考株基因相似性达 到９６．１ 以上，说明该基因在ＬＭ中较为保守。 关键词：单核细胞增生性李斯特菌；禽产品；生物学特性；Ｈｌｙ基因 中图分类号：￥８５２．６１ 文献标识码：Ａ 文章编号：０５２９—６００５（２０１２）０７—００１１－０３ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ６ Ｌｉｓｔｅｒｉａ Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ｐｏｕｌｔｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＷＵ Ｘｉａｏ—ｗｅｉ ，ＸＵ Ｃｈｅｎｇ—ｇａｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈａｏ—ｇｕａｎ ，ＪＩＡＮＧ Ｊｉｎｇ－ｗｅｉ ， ＹＥ Ｈｅ—ｉｉａ ，ＯＵ Ｙａｎ－ｙｉ ，ＸＵ Ｘｉａｏ—ｑｉｎ 一，ＬＩＡＯ Ｍｉｎｇ ’。 （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０６４２，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６２３，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ； ４．Ｎａｎｈａｉ Ｅｎｔｒｙ－Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｆｏｓｈａｎ ５２８２００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｉｘ Ｌｉｓｔｅｒｉａ Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｐｏｕｌｔｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ．Ａｎ— ｔｉ—ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｓｕｉｔａｂｌｅ ｇｒｏｗｔｈ ｐＨ ｒａｎｇｅ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ．Ａｌｌ ６ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｍａｎｙ ｄｒｕｇｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ Ｓｏｄｉｕｍ，Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，Ｋａｎａｍｙｃｉｎ，Ｃｅ— ｆａｚｏｌｉｎ Ｖ，Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ；ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ Ｂ，ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ—ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ，Ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ．Ｔｈｅ ｉＳＯ— ｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ｓｕｒｖｉｖｅ ｉｎ ＰＨ ４．Ｏ～１０．５，ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｃａｕｓｅ ＢＡＢＬ／ｃ ｍｉｃｅ ｄｅａｔｈ ｗｉｔｈ １０。ＣＦＵ ｄｏｓｅ ｂｙ ｉｎｔｒａｐｅｒ— ｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ｃａｕｓｅ ＣＯｎｉ ｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｉｎ Ｎｅｗ Ｚｅｅｌａｎｄ ｒａｂｂｉｔｓ ｂｙ ｉｎｊ ｅｃ— ｔｉｏｎ ｖｉａ ｅｙｅ—ｄｒｏｐ ｒｏｕｔｅ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｏｓｅ ｔｏ ｈｅａｌｔｈｙ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｈｕａｎｇ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｂｙ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｄｉｄ ｎｏｔ ｃａｕｓｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｓ．Ｔｈｅｓｅ ｈｌｙ ｇｅｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｈａｄ ａ ｈｉｇｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ９６．１ ～１００ ｗｉｔｈ Ｃ５３００５，Ｃ５３０ｏ３ ａｎｄ ＤＱ０５４５８９，ＤＱ８４４１４８，ＥＦ１８２４５６ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ ｄａｔａｂａｓｅ，ＳＯ ｈｌｙ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｏｎ— ｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ＬＭ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｓｔｅｒｉａ Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｎｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ Ｈｌｙ ＣｏｒｒｅｓｐＯｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩＡＯ Ｍｉｎｇ 单核细胞增生李斯特菌（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ， 流产、败血症等，病死率高达３Ｏ ９／５～７Ｏ ，是目前 ＬＭ）广泛存在于自然界，可导致人和动物脑膜炎、 人类最重要的食物源性病原菌之一［１ ］，也被列为 ２１世纪对中国人卫生健康具有重大影响的１２种病 收稿日期：２０１卜１２—３Ｏ 基金项目：广东出入境检验检验局科技项目（２０１１ＧＤＫ４６） 原微生物之一［２］。近年来，许多国家报道，从多种食 作者简介：吴晓薇（１９７５一），女，兽医师，硕士，从事动物检疫工 品中分离到李斯特菌或食品污染李斯特菌而引起的 作，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｕｍａｏｗｅｉ８＠１２６．ｃｏｒｎ 食物中毒暴发事例，已引起了公共卫生部门的广泛 通讯作者：廖明，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｌｉａｏ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ １２ 中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第７期 关注［２ ］，许多国家都加强了对该菌的检测及研究。 为了解广州地区的禽产品中ＬＭ的污染情况， 课题组采集不同地点和来源的各种禽产品，分离到 ６株ＬＭ。本文进一步进行研究了６株ＬＭ分离株 生物学特性，为预防广州地区李斯特菌病的暴发、流 行及防制提供依据。 １材料与方法 １．１菌株ＬＭ标准菌株Ｃ５３００３、Ｃ５３ＯＯ５，购自中 国药品生物制品检定所。６株从广州禽产品中分离 的ＬＭ，分别命名为４７ＬＭ、２３３ＬＭ、３７４ＬＭ、７７６ＬＭ、 ８０９ＬＭ株和８１４ＬＭ。 １．２ 实验动物 体重为１６～１８ ｇ的ＳＰＦ级 ＢＡＢＬ／ｃ小鼠，购自中山医科大学实验动物中心；１Ｏ 日龄健康粤黄鸡，购自华南农业大学实验种鸡场；体 重为３ ｋｇ左右清洁级新西兰公兔，购自南方医科大 学实验动物中心。 １．３试剂氯霉素、卡那霉素、头孢唑啉、庆大霉素、 痢特灵、阿莫西林、环丙沙星、头孢孟多、新霉素、壮观 霉素、丁胺卡那霉素、头孢拉定、氟派酸、红霉素、利福 平、链霉素、青霉素Ｇ、复方新诺明、多黏菌素Ｂ和新 生霉素药敏纸片为杭州天和生物制品科技有限公司 产品。 １．４药敏试验 按常用的扩散法药敏试验（Ｋｉｒｂｙ —Ｂａｕｅｒ法３）进行。采用ｗＨＯ质控标准菌的敏感 性及抑菌环大小采用划分方法报告结果。 １．５ ｐＨ值对分离株生长的影响 按照ＴＳＢ—ＹＥ 使用说明称量配制后，按要求用１Ｏ％氢氧化钠溶液 或盐酸调节ｐＨ值，配制ｐＨ值分别为２．０、３．０、 ４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、９．２、 ９．４、９．６、９．８、１０．０、１０．５、１１．０的培养液，高压灭 菌。将ＬＭ分离株接种于一系列ＴＳＢ－ＹＥ中，３５℃ 培养２４￣４８ ｈ，观察其生长情况，判断能使ＬＭ生 长的ｐＨ值。同时设相应的阴性对照。 １。６动物致病性试验 将ＬＭ分离菌株分别接种 ＴＳＢ＿ＹＥ，３５℃培养２４ ｈ后，以２ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心３Ｏ ｍｉｎ，弃去上清液，用灭菌生理盐水制成浓度约为 １Ｏ ＣＦｕ／ｍＬ。通过腹腔注射途径感染５只体重为 １６～１８ ｇ ＳＰＦ级ＢＡＢＬ／ｃ小鼠、通过点眼途径感染 ３只清洁级的新西兰公兔、通过肌肉注射途径感染 １Ｏ只健康黄鸡，各０．１ ｍＬ（约１０。ＣＦＵ）。同时用标 准株Ｃ５３００５英诺克李斯特菌作阳、阴性对照。攻 毒后连续观察７～ｉ０ ｄ，记录小鼠、兔、鸡的症状及死 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 亡情况。 １．７分离株的分子生物学特性研究 参照吴晓薇 等［５ 方法克隆６株分离株Ｈｌｙ基因，并送上海生工 生物工程技术服务有限公司进行序列测定。借助 ＤＮＡＳｔａｒ ５．０７分析软件，将标准株Ｃ５３００５株和 Ｃ５３ＯＯ３及ＬＭ分离株的Ｈｌｙ基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ 上的ＬＭ基因的序列进行同源性比较。 ２结果与分析 ２．１药敏试验结果ＬＭ分离株对２０种抗生素的 药敏试验的结果表明，６株ＬＭ分离株对先锋必、氯 霉素、卡那霉素、头孢唑啉、庆大霉素、壮观霉素、丁 胺卡那霉素、氟哌酸、红霉素、利福平、链霉素、青霉 素Ｇ均敏感；对环丙沙星、痢特灵、头孢孟多有中度 敏感；对多黏菌素Ｂ、复方新诺明，新生霉素，新霉素 有耐药性。６株分离株与标准菌株药物敏感谱基本 相似。但是各分离株之间也有一定的区别，个别分 离株对某些药物会产生的耐药性，如３７４ＬＭ分离 株对新霉素就产生的耐药性。 ２．２ ＬＭ分离株在不同的ＰＨ值ＴＳＢ－ＹＥ中生长 情况６株分离株和标准株在不同的ｐＨ值ＴＳＢ— ＹＥ培养液生长情况结果表明，标准株Ｃ５３ＯＯ５ ｐＨ 值范围为３．８～ｌＯ．５，ＬＭ分离菌４７、７７６、８１４的 ｐＨ值范围为４．２～１０．５，ＬＭ分离菌２３３、３７４的 ｐＨ值范围为４．Ｏ～１Ｏ．０，ＬＭ分离菌８０９的ｐＨ值范 围为４．０～１０．５。ＬＭ分离株的ｐＨ值适应范围比 标准株略窄。 ２．３动物致病性试验小鼠接种菌液２４～７２ ｈ内， 呈现不同的死亡情况，其中标准株Ｃ５３ｏｏ５作阳性对 照组，４７ＬＭ分离株、３７４ＬＭ分离株和８１４ＬＭ分离株 对小鼠表现出较强的毒力，小鼠在２４ ｈ内全部死亡； ２２３号和８０９号菌株对小鼠表现出中等的毒力，在４８ ｈ内全部死亡；７７６菌株有一定的致病力，在７２ ｈ内 全部死亡，剖检死亡小鼠，可见到肝脏有点状或斑状 灰白色坏死灶。阴性对照组没有小鼠的死亡。ＬＭ 分离株的小鼠攻毒试验具体的结果见表１。 表１ ＬＭ分离株的小鼠攻毒实验结果 攻毒后 标准株 攻毒的菌号 的天数 Ｃ５３ＯＯ５ 第１天 ５／５ 第２天 ｏ１５ 第３天０／５ 第４天 ｏ／５ ＊：死亡数／每组小鼠总数 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 中国兽医杂志２０１２年（第４８卷）第７期 １３ 用６株分离株对新西兰公兔攻毒后１８～２４ ｈ 内感染兔会出现明显的的脓性结膜炎，２４～７２ ｈ之 阳性对照组和阴性对照组的鸡没有出现异常情况。 ２．４ 分离株分子生物学特性 借助ＤＮＡＳｔａｒ ５．Ｏ７ 分析软件，将６株分离株的Ｈｌｙ基因序列与标准株 Ｃ５３００５株和Ｃ５３００３及ＧｅｎＢａｎｋ上ＤＱＯ５４５８９、 内会越来越严重，到第７天以后分泌物减少，结膜炎 症和角膜仍然浑浊。１０ ｄ兔的眼结膜基本恢复。 阳性对照组的兔同样出现这样的情况，阴性对照组 ＤＱ８４１１４１８和ＥＦ１８２４５６的ＬＭ基因的序列进行同 源性比较。结果显示，Ｈｌｙ基因与参考株相比具有 的兔没有出现异常情况。 用６株ＬＭ分离株对健康黄鸡接种后，试验鸡、 ｅｒｅｅｎｌ １０ｅｎｉｌ 高度的同源性，达９６．１ ～Ｉｏｏ ，见图１。 １ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ 牯 ｇ １０ １１ １。ｌ ９７ ０ ９８．９ ９７．１【 ｇ７．１ ｇ７．０ ９７ ０ ９７．１ ９６．９ ｇ６ ９ ９７．０ ２ ｊ Ｉ—■９８ ２ ９９．９ ９９．９ ９９．８ ９９．９ ｇｇ．ｇ ９９，７ ９９．７ ９９．７ ２ ＤＱ０５４５８９ ＤＱ８４４１ Ｉ４８ ∞ ３ １ｌ１ ４．０藕 ９ ６．２＿ ９６．２ ９６．１ ９６．２ ９６ ２ ９８．０ ９６．０ ９６．２ ３ ４ ３．０ ０．１ ３．９藕■ｉｌ ００．０ ９９．９ ９９．９ １ ０Ｏ．０ ９９．８ ９９．７ ９ ９＿８ ４ 嚣 ３．０ ｌ ０．１ ３．ｇ ０．０ ｉ＿ ９９．９ ｇｇ ｇ １ ００．０ ９９．８ ９ｇ．７ ９９．８ ｌ５ ＥＦ１ ８３４５８ Ｈ Ｌ’＿ ５ ＨＬ＿Ｙ＿３ 兰 ∞ 莹 石 ６ ｊ．１ ０．２ ４．０ ０．下 ０．１曩■ ．８ ９９．９ ９９．７ ｇｇ．６ ９ｇ．７ ６ ７ ３ ０ ｉ ０．１ ９ ０．１ Ｄ．１ ０＿２疆 ９９．９ ９９． ９ｇ．７ ｇ９ ７ ７ ８ ３．０｝０ １ ３．ｇ ０．Ｏ ０．０ ０．１ ０．１ ｇ９．８ ９９．７ ９９．８ ８ ＨＩ ４７ ＨＩｙ－２３３ Ｈｌｙ－３７４ ９ ３．２ ｌ ０ ３ ４ １ ０．２ ０．２ ０．３ ０ ３ ０．２ —一９ ６ ９９．６ 尊 ｔ０ ３．２ ｉ ０ ３ ４．１ ０．３ １ ｉ ２ ３ ４ Ｈｌｙ－７７６ ＨｌＹ－８０９ ３ ０．４ ８．３ ０．３ ０－４疆＿ ９９．６ １０ ５ ６ ７ ８ ９ １０ ｌ１ １１ ３．０ ｉ ０．３ ３．９ Ｏ．２ ０ ２ ０．３ ０．３ ０．２ ０．４ ０．４ 一１１ ． Ｈ ８１４ 图１分离株Ｈｌｙ基因的同源性比较 ３讨论与结论 用结果。 参考文献： ［１１ Ｂｈａｓｉｎ Ｓ Ｋ，Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ Ｓ，Ｓｈａｒｍａ Ａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ａ— ｍｏｎｇｓｔ ａｄｕｌｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｇａｒｄｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ ｏｆ ｍａｌａｒｉａ ｉｎ ２１ 食源性致病菌的耐药性对食品安全及人类健康 的影响已经引起许多国家的警惕［６。］。６株分离ＬＭ 株对多黏菌素Ｂ、复方新诺明、新生霉素、新霉素有 耐药性，与巢国祥、赵悦等研究结果相似［６ ］。禽产 品分离株耐药性严重，这主要是由于生产过程中抗 生素的使用造成的严重选择压力所致［７］。美国 ＦＤＡ和部分欧洲国家曾允许使用抗生素作为动物 饲料添加剂，造成动物源性食品中分离株耐药性大 幅提升，基于这一现状，２００６年欧盟禁止使用抗生 素作为动物饲料添加剂［８］。ＬＭ耐药性的发展对疾 ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｍｍｕｎ Ｄｉｓ，２００１，３３（４）：２８６—２９６． ［２］蒋原．食源性病原微生物检测指南［Ｍ］．北京：中国标准出版 社，２０１０：１１３—１１５． ［３］Ｎｉｇｈｔｉｎｇａｌｅ Ｋ Ｋ，Ｗｉｎｄｈａｍ Ｋ，Ｗｉｅｄｍａｎｎ Ｍ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ａｎｉｍａｌ ｌｉｓｔｅｒｉｏｓｉｓ ｃａｓｅｓ ａｎｄ ｆｏｏｄｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ， ２００５，１８７（１６）：５５３７—５５５１． ［４１牛华星，肖永霞，尹旭升，等．单核细胞增多性李斯特菌的毒 力因子及检测研究进展口］．畜牧与饲料科学，２００９，３０（１）： ６—７． 病治疗将是严重的挑战，对ＬＭ耐药性的发展趋势 应该引起关注。 ［５］吴晓薇，徐成刚，马保华，等．单增李斯特菌溶血素基因的克隆 及原核表达口］．中国动物检疫，２０１１，２８（８）：４６—５０． 本研究的结果显示，ＬＭ分离株ｐＨ值的适应 范围为４．０～１０．５，说明ＬＭ对酸碱有较强的抵抗 力和耐受力，这与杨正时等研究结果一致［９］。 ［６］ 巢国祥．８类食品单核细胞增生李斯特菌流行特征及耐药性 状研究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００５，１５（５）：５１９—５２１． ［７］ 赵悦，付萍，裴晓燕。等．中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐 药特征分析［Ｊ］．中国食品卫生杂志，２０１２，２４（Ｉ）：５－８． ［８］Ｌｕｎｇｕ Ｂ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ：Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｆｏｏｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｏｏｄｆｏｒｎｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ Ｄｉｓ，２０１０，６：１０８９一 Ｉ ６株分离株的Ｈｌｙ基因序列与与参考株相比具 有高度的同源性，达９６．１ ～１００％。该基因是ＬＭ 的主要毒力基因，关系到ＬＭ的毒力的强弱［２“］，该 基因的遗传变异小，更有利于细菌毒力变异的研究。 同时该基因的变异小，但是不同菌株毒力有一定的 １０９６． ［９］杨正时，房海．人及动物病原细菌学［Ｍ］．石家庄：河北科技 出版社，２００３：８８４—８９４． 差异，说明了ＬＭ毒力是该基因与其他基因协同作