牛奶中菌落总数的测定

一般样品到达检验中心的话，由微生物检测中心先领取样品，因为其他科室不能保证无菌取样，会影响微生物检验的结果。要求生鲜乳必须在采后四小时内进行检测。

取样：量取10 mL置盛有90 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

配制浓度梯度：（1）用1 mL 无菌吸管或移液枪吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），用漩涡震荡器混合均匀，制成10﹣²的样品匀液。

（2）按上述操作程序，制备10﹣³、10-4系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。

倒平板：吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。注意，要分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温，温度过高可能会杀死细菌，一般以不烫手为宜）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀（不均的话，会使菌落连成片，无法计数）。

培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。

菌落计数:可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 若所有平板上为

蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

1、 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。