江西农业学报２０１１，２３（９）：４７～５Ｏ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｅｕｌｔｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ ＤＮＡ分子标记在果树种质资源遗传多样性研究中的应用 周蓓蓓，朱海军，生静雅，刘广勤 （江苏省农业科学院园艺研究所，江苏南京２１００１４） 摘要：简要介绍了ＤＮＡ分子标记的主要类型、原理及特点，重点综述了ＲＦ【 、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、ＳＳＲ、ＥＳＴ—ＳＳＲ和ＳＮＰ标 记技术在果树种质资源遗传多样性研究中的应用现状。 关键词：果树；ＤＮＡ分子标记；遗传多样性；应用 中图分类号：￥３２１文献标识码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１１）０９—００４７—０４ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｔｒｅｅ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＺＨＯＵ Ｂｅｉ—ｂｅｉ，ＺＨＵ Ｈａｉ—ｊｕｎ，ＳＨＥＮＧ Ｊｉｎｇ—ｙａ，ＵＵ Ｇｕａｎｇ—ｑｉｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｌ。ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｂｒｉｅｆｌｙ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｔｙｐｅ，ｐｒｉｎｃｌｐｌｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ａｎｄ ｅｍｐｈｍｉｃａｌｌｙ ｓｕｍｍｓｘｉｚｅｓ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ＲＦＬＰ，ＲＡＰＤ，ＡＦＬＰ，ＳＳＲ，ＥＳＴ—ＳＳＲ ａｎｄ ＳＮＰ ｍａｒｋｅｒ ｔｅｃｈｎｉｕｑｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅ；ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ；Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ 长期以来，运用传统的育种手段对多年生木本果树 展，并且已在果树种质资源遗传多样性分析等方面得到 进行遗传改良时，由于受到树体大、童期长、自交不亲和、 了广泛的应用。 遗传高度杂合等因素的影响，果树遗传育种进程较为缓 目前果树研究应用的ＤＮＡ标记技术已有多种，主要 慢。随着分子生物学技术的发展，以物种基因型特征为 包括限制性片段长度多态性（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ 鉴定指标的ＤＮＡ分子标记技术的出现，为果树遗传育种 Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍ 研究提供了新的技术手段，给果树遗传育种带来了新的 Ａｍｐｌｉｉｆｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）、扩增片段长度多态 契机。 性（Ａｍｐｌｉｉｆｅｄ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＡＦＬＰ）、简 ＤＮＡ分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记 单重复序列（Ｓｉｍｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｐｅａｔ，ＳＳＲ）、源于ＥＳＴ 后发展起来的一种以ＤＮＡ多态性为基础的遗传标记 。 （Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｔａｇｓ，表达序列标签）库的ＳＳＲ（ＥＳＴ 与传统的遗传标记相比，ＤＮＡ分子标记具有遗传稳定、 —ＳＳＲ）和单核苷酸多态性（Ｓｉｎｇｌｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｍｏｒ－ 标记数量丰富、不影响目标性状表达、多态性高、选择响 ｐｈｉｓｍ，ＳＮＰ）等，这些ＤＮＡ标记技术各具特色，各有所用。 应高等优势，这使其成为理想的遗传标记而迅速得到发 在表１中简单列出了几种主要分子标记间的比较隋况。 表１ 常用的几种分子标记技术的相互比较 １ ＤＮＡ分子标记在果树种质资源遗传多样性研 果树作为一种重要的经济作物，在世界农业生产上 究中的应用 占有重要的地位。目前果树种质资源的搜集、保存和利 收稿日期：２０１１—０７—２５ 基金项目：２０１０年中央财政林业科技推广示范项目“薄壳山核桃良种及早果丰产栽培技术体系示范推广”（５９１１００１）；２０１１年国家林业公 益性行业科研专项“薄壳山核桃良种筛选与配置技术研究与示范”（２０１２０４４０４）；２０１１年江苏省林业三项工程项目“薄壳山核桃 容器育苗技术示范与推广”（１ｙｓｘ［２０１１］１４）。 作者简介：周蓓蓓（１９８３一），女，江苏如东人，研究实习员，硕士，研究方向：果树分子生物技术。 通讯作者：刘广勤。 ４８ 江西农业学报 ２３卷 用已经受到许多国家和地区的高度重视。遗传多样性主 分析，在扩增所得到的１３１个条带中多态性条带有１０７ 要是指种内不同居群之间或同一个居群内不同个体遗传 变异的总和 Ｊ，是生物多样性的基础和重要组成部分。 对果树自然群体和人工培育品系的遗传多样性进行评价 是有效保护、开发和利用果树种质资源的基石，较为全面 地了解现有果树种质资源的遗传多样性，可以减少育种 工作中亲本选配的盲目性，提高果树的育种效率和育种 的预见性。ＤＮＡ分子标记可以为果树种质资源的研究 条，多态性条带百分率达８１．７％，说明花梅和果梅各品 种间具有丰富的遗传多样性；同时ＵＰＧＭＡ聚类显示４６ 个花梅和果梅品种的遗传相似系数为０．６３～０．８３，并在 遗传相似系数０．６６处，供试的４６个品种被分为５组 Ｊ。 ＲＡＰＤ标记不仅在很大程度上验证了以往果树品种 的形态学分类和系统演化结果，而且为果树遗传多样 性、亲缘关系和分类演化研究提供了新颖可行的分子学 提供几乎无限的多态性证据，成为检测其遗传多样性的 方法。 最有效工具。下面就几种ＤＮＡ分子标记方法在果树种 １．３扩增片段长度多态（ＡＦＬＰ）标记ＡＦＬＰ结合了 质资源遗传多样性评价中的应用做以下综述。 ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术的特点，具有ＲＦＬＰ技术的可靠性和 １．１限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）标记ＲＦＬＰ是基 ＰＣＲ技术的高效性。其基本原理是利用一个ＤＮＡ中酶 于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术的最具代表性、最早发展起来的 切位点少的内切酶和一个内切位点多的内切酶组合，对 ＤＮＡ分子标记。该方法的基本原理是利用特定的限制 基因组ＤＮＡ进行完全酶切，再用双链人工接头与酶切片 性内切酶切割生物体基因组ＤＮＡ，不同个体间由于酶切 段的粘性末端连接作为模板，先进行预扩增，之后再进行 位点间的插入、缺失、重组或突变引起不同的基因型间 选择性ＰＣＲ扩增，最后通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳展 ＤＮＡ片段在长度上的差异，这种同源序列的酶切片段在 现出多态性。ＡＦＬＰ标记稳定性强，重复性好，但这种标 长度上的差异通过已克隆和标记的ＤＮＡ片段作为同源 记操作步骤较繁琐，费用也较高，且受专利保护。Ｇｏｔｏ— 序列的探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，通过放射自显影或非同 Ｙａｍａｍｏｔｏ 用ＡＦＬＰ标记对１６份葡萄资源进行了鉴定 位素来检测ＤＮＡ的多态性。ＲＦＬＰ标记具有重复性好、 分类，分析结果与之前以表现型和地理分布为依据的分 可靠性好、呈共显性遗传、等位基因丰富等优点，但存在 类结果相符。易干军等” 采用ＡＦＬＰ标记将供试的３２ 实验费用高、技术复杂、有放射性危害等缺点。Ｂｏｗｅｒ 个香蕉品种聚类分为６个独立群体。易干军等¨ 以香 等 采用ＲＦＬＰ标记技术对３３个酿酒葡萄品种的遗传 牙蕉３５个地方品种（系）为试材，用ＡＦＬＰ标记对其亲缘 多样性进行了评价。果树在长期的无性繁殖过程中，形 关系进行了分析，鉴别认为引自不同国家的３个品种“几 成了形形色色的突变类型，通过分子标记也可以鉴别众 内亚”、“苹果”以及“阳江矮”为同一个香牙蕉品种。上 多突变类型。Ｎｙｂｏｍ 以ＲＦＬＰ技术成功鉴别了“红星” 官凌飞等用荧光ＡＦＬＰ标记对来源于Ｅｌ本及我国江苏、 苹果及其突变体，发现其在杂交谱带的强弱上有差别。 浙江、广东等７个省份的５０个果梅品种进行了快速鉴 ＲＦＬＰ作为一种比较成熟的ＤＮＡ分子标记技术，在 定，并利用ＡＦＬＰ指纹信息对其遗传多样性指数进行了 果树物种的遗传结构和遗传多样性研究方面取得了一些 分析，发现Ｅｌ本，中国江苏、浙江果梅的遗传多样性水平 成绩，同时对果树遗传育种工作也起到了一定的指导 明显高于其他地区，究其原因，可能由于这两个地区果梅 作用。 品种的来源渠道多或者存在其他物种的基因渗入 。 １．２随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）标记ＲＡＰＤ标记是 ｌ－４简单重复序列（ＳＳＲ）标记ＳＳＲ又称为微卫星 １９９０年由Ｗｉｌｌｉａｍｓ 和Ｗｅｌｓｈ。。 领导各自团队发现的一 （Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ）” ，它是指由少数几个核苷酸为单位多 种检测ＤＮＡ多态性的方法。其基本原理是运用单个或 次串联重复的ＤＮＡ序列。这些序列广泛存在于真核细 多个随机引物（通常为单个的１０碱基寡聚核苷酸），经 胞的基因组，其串联重复的数目是可变的而且呈现高度 ＰＣＲ扩增特异ＤＮＡ片段，得到多态性标记。该标记技术 的多态性，在单个微卫星位点上可以做共显性的等位基 具有费用低、标记数量多、所需ＤＮＡ量少、引物不受物种 因分析。ＳＳＲ为共显性标记，与ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ相比，它 限制等优点，但呈显性遗传，不能区分杂合体且易产生非 具有多态性高、重复性高、数量丰富等特点，其在果树种 特异性带，稳定性差。近年来，ＲＡＩＤ标记技术大量应用 质资源遗传多样性研究等方面的应用受到广泛重视。 于果树遗传多样性研究及亲缘关系鉴定等方面。张晓莹 Ｙａｍａｍｏｔｏ等 用１０对ＳＳＲ引物对桃种质资源进行了 等 利用ＲＡＰＤ标记对ｌ６个枇杷品种的遗传基础进行 标记分析，发现桃品种“冈山白”和“上海水蜜”具有很近 了分析，发现枇杷品种基因型间存在着极为丰富的遗传 的亲缘关系，进一步验证了日本桃起源于中国桃。葛志 多样性。李晓颖等 利用１１个碱基引物，对１６个果梅 刚等利用２４对ＳＳＲ引物对３８个蟠桃品种和９个其他类 品种进行了ＲＡＰＤ分析，根据ＰＡＧＥ电泳系统获得的标 型桃品种资源的ＤＮＡ进行了ＳＳＲ—ＰＣＲ分析，共获得了 记信息对１６个果梅品种进行了聚类分析，结果反映了果 １７９个扩增位点，其中多态性位点１７１个，多态率达９５． 梅品种间的亲缘关系。王玉娟等采用改良的ＲＡＰＤ标记 ５３％；并发现南方蟠桃品种群的遗传多样性相对较低，北 对２５个花梅和２１个果梅品种的基因组总ＤＮＡ进行了 方蟠桃品种群的遗传多样性相对较高；群体间基因分化 ９期 周蓓蓓等：ＤＮＡ分子标记在果树种质资源遗传多样性研究中的应用 ４９ 系数较小，遗传变异主要来自群体内，表明南方品种群种 质在我国蟠桃新品种选育中起到了重要作用¨ 。俞明 １．６单核苷酸多态性（ＳＮＰ）标记ＳＮＰ是指在生物基 因组水平上由单个核苷酸变异引起的ＤＮＡ序列多态性。 亮等 筛选出２８对ＳＳＲ引物，对１１６份黄肉桃种质和 １９份其它桃或桃近缘种种质进行了ＳＳＲ标记分析，扩增 研究ＤＮＡ水平上的多态性最彻底最精确的方法即为直 接测定某特定区域的核苷酸序列，并将其与相关基因组 中对应区域的核苷酸序列进行比较，从而检测出单个核 苷酸的差异。Ｓａｌｍａｓｏ等 利用ＳＮＰ对葡萄４个功能性 基因进行了研究，发现ＳＮＰ同样适于对葡萄进行多样性 评价。ＳＮＰ是目前所有分子标记中多样性最丰富的标 出２０６个等位基因，其中多态性等位基因有１５９个，多态 率为７６．５６％；并用ＵＰＧＭＡ构建了进化树，结果表明中 国地方黄桃品种与育成品种间亲缘关系较远，亚洲育成 品种与美洲育成品种间亲缘关系最近，其次为欧洲育成 品种。高华等 采用ＳＳＲ标记对４０个苹果品种的遗传 记，能够用于果树种质资源遗传多样性研究，对于果树种 多样性进行了研究，发现部分系谱相同或相近的品种遗 传相似系数较大，相似系数聚类的范围较小，种质遗传基 础相对较窄。因此在苹果杂交育种亲本选择时，必须加 强不同来源种质的利用和特异亲本类型的培育。 传统的基因组ＳＳＲ标记需要经过基因组ＤＮＡ文库 构建、探针杂交、克隆测序等复杂过程 ，同时还受到探 针ＳＳＲ重复单元种类的限制，存在费时耗力、成本高等 问题，因而在一定程度上影响了其标记作用的发挥。 １．５ ＥＳＴ—ＳＳＲ ＥＳＴ是指从ｃＤＮＡ文库中随机挑选 ｃＤＮＡ克隆，进行大规模测序所获得的ｃＤＮＡ的５ 或３ 端 序列，长度一般为１５０～５００ ｂｐ 。随着ＥＳＴ数据资源 的不断丰富，基于ＥＳＴ库开发的ＳＳＲ标记成为一个简便 快速而有效的标记。由于ＥＳＴ—ＳＳＲ来源于基因本身， 是对基因内部变异的一种直接评价，可直接反映相关基 因的多样性，因而在不同物种间有良好的通用性 。用 ＥＳＴ代替基因组测序，使得试验费用大大降低，同时效率 大大提高。作为新型的分子标记，ＥＳＴ—ＳＳＲ标记除了 具备传统ＳＳＲ标记多态性高、共显性、重复性好等优点 外，还以其开发经济和通用性高等优势在果树分子遗传 研究中得到了开发和应用。Ｃｈｅｎ等 利用柑橘ＥＳＴ 库，开发了１００对ＳＳＲ引物用于检测柑橘两个不同属甜 橙［Ｃ／ｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏｓｂｅｓｋ］和枸橘［Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ （Ｌ．）Ｒａｆ．］的多样性和杂合度。王西成等 发现梨 ＥＳＴ—ＳＳＲ标记开发效率较高，对梨品种的鉴定与遗传 多样性分析具有重要价值。上官凌飞等从杏的ＥＳＴｓ中 选择设计了５０对ＳＳＲ引物，对２４个杏品种、８个果梅品 种、ｌ６个花梅品种进行了遗传多样性分析，４０对引物产 生了理想的ＰＣＲ产物，其中２５对引物扩增出多态性条 带，引物有效扩增率为８０％，其中多态性占６２．５％，说明 利用杏ＥＳＴ序列开发ＥＳＴ—ＳＳＲ标记是高效且可行的； 挑选扩增效果最好的２０对引物对这些供试材料进行 ＰＣＲ扩增，来源于杏的ＥＳＴ—ＳＳＲ引物在梅中有很高的 通用性，杏和梅是遗传差异明显的两种植物，果梅与花梅 在遗传上是不能分为两类的同种植物 Ｊ。 随着ＥＳＴ的爆炸性的增长，ＥＳＴ—ＳＳＲ标记开发、利 用的不断深人，相信这项技术将在果树种质资源分析、品 种鉴定及遗传作图等研究领域有一定的应用前景，并为 果树的遗传育种研究提供新的分子标记方法 ］。 质资源保存、利用具有重要意义。但由于大多数果树尚 未进行完整基因组测序，目前尚无法大规模开发ＳＮＰ。 相信随着测序技术的改进和更多果树树种全基因组的测 序完成’，以及ＥＳＴ的大量积累，果树ＳＮＰ标记的开发以 及鉴定数量将取得突破性发展 。 ２ ＤＮＡ分子标记在果树研究中的发展前景 客观地评价、有效地保存、挖掘和创新果树种质遗 传资源对于果树产业的可持续发展具有重要意义。而果 树种质资源的准确鉴定及分子遗传规律的深人研究，关 键在于ＤＮＡ分子标记技术的发展。在果树种质资源收 集、整理和表型性状评价的基础上，应用ＤＮＡ分子标记 技术对果树种质资源进行遗传多样性研究，可以为果树 种质的品种识别、起源演化和亲本选配提供有效依据。 我国有着丰富的果树种质资源可供发掘利用，在今后的 果树遗传育种工作中应扩大亲本的选择范围，加大优异 种质资源的选择力度。 由于ＤＮＡ分子标记技术能够直接分析遗传物质本 身，不仅能区分相近物种，而且可以检测变种、品种及群 体之间ＤＮＡ的细微变异，因此在果树种质资源研究、遗 传图谱构建、基因定位、分子标记辅助育种等方面均显示 出广阔的应用前景。随着ｃＤＮＡ和ＥＳＴ文库的不断构 建，数据资源的更加丰富，分子标记技术将继续向深度和 广度方向发展。各种类型分子标记的综合利用，并与常 规育种技术相结合，必将推动果树遗传育种研究的迅猛 发展。 参考文献： ［１］白瑞霞，彭建营．ＤＮＡ分子标记在果树遗传育种研究中的应 用［Ｊ］．西北植物学报，２００４，２４（８）：１５４７—１５５４． ［２］陈灵芝．中国的生物多样性现状及其保护对策［Ｍ］．北京：科 学出版社，１９９３． ［３］Ｂｏｗｅｒ Ｊ Ｅ，Ｍｅｒｅｄｉｔ Ｈ Ｃ Ｐ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ａｍｏｎｇ ｗｉｎｅ ｇｒａｐｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ （ＲＦＬＰ）ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ａｍｅｒ Ｓｏｃ Ｈｏｒｔ Ｓｃｉ，１９９６，１２（１４）：６２０ —６２４． ［４］Ｎｙｂｏｍ Ｈ．ＤＮＡ ｉｆｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｓｐｏｒｔｓ ｏｆ Ｒｅｄ Ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ ａｐｐｌｅｓ ［Ｊ］．Ｈｏｒｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２５：１６４１—１６４２． ［５］Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｊ ＧＫ，Ｋｕｂｅｌｉｋ Ａ Ｒ，Ｌｉｖａｋ Ｋ Ｊ，ｅｔ ａ１．ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｏｒ－ ｐｈｉｓｍｓ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｂｙ ａｒｂｉｔｒａｒｙ ｍｅｒｓ ａｒｅ ｕｓｅｆｕｌ ａｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋ． 江西农业学报 ２３卷 ｏｒｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９０，１８：６５３１－６５３５． ［６］Ｗｅｌｓｈ Ｊ，ＭｃＣｌｅｌｌａｎｄ Ｍ．Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｇｅｎｏｍｅｓ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ａｒｂｉ￣ａｒｙ ｐｒｉｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｓｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９０，１８：７２１３— ７２１８． ［７］张晓莹，钱剑林，王化坤，等．枇杷ＲＡＰＤ扩增产物的不同电泳 检测及其序列特征分析［Ｊ］．浙江农业学报，２０１０（５）：５７０ —５７５． ［８］李晓颖，宋长年，张彦苹，等．果梅ＲＡＰＤ标记不同电泳指纹比 较及扩增产物序列分析［Ｊ］．南京林业大学学报：自然科学版， ２ＯＬＯ（５）：２９—３３． ［９］王玉娟，房经贵，于华平，等．基于改良ＲＡＰＤ标记的花梅与果 梅品种的遗传关系分析［Ｊ］．植物资源与环境学报，０２１１（２）： ２８—３４． ［１０］Ｇｏｔｏ—Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｎ．Ｐｈｅｎｅｔｉｃ ｃｌｕｓｔｅｉｒｎｇ ｏｆ ｇｒａｐｅｓ（ ｓｐｐ．） ｂｙ ＡＦＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｒｅｅｄｉｇｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２ＯＯＯ，５０：５３—５７． ［１１］易干军，余晓英，霍合强，等．粉蕉、大蕉和龙牙蕉的ＡＦＬＰ分 类研究［Ｊ］．园艺学报，２００２，２９（５）：４１３－４１７． ［１２］易干军，于晓英，霍合强，等．应用ＡＦＬＰ进行香牙蕉品种 （系）的鉴别与分类［Ｊ］．果树学报，０２０２，１９（４）：２４７—２５１． ［１３］上官凌飞，李晓颖，房经贵，等．果梅（Ｐ／＇／／／ｔｏ．￥ ）品种的荧 光ＡＦＬＰ指纹分析［Ｊ］．果树学报，２００９，２６（４）：４７５—４８０． ［１４］Ｌｉｔｔ Ｍ，ｌｎｉｔｙ Ｊ Ａ．Ａ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，１９８９，４４：３９７ —４０１． ［１５］Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ，Ｍｏｃｈｉｄａ Ｋ，Ｉｍａｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｐａｒｅｎｔａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｐａｃｈｅｓ ｕｓｉｎｇ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｂｒｅｅｄｉｇｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２００３，５３（１）：３５—４ｏ． ［１６］葛志刚，俞明亮，马瑞娟，等．蟠桃种质ＳＳＲ标记的遗传多样 性分析［Ｊ］．果树学报，２００９，２６（３）：３００—３０５． ［１７］俞明亮，马瑞娟，沈志军，等．应用ＳＳＲ标记进行部分黄肉桃 种质鉴定和亲缘关系分析［Ｊ］．园艺学报，２０１０，３７（１２）：１９０９ —１９】８． ［１８］高华，樊红科，万怡震，等．苹果栽培品种的ＳＳＲ鉴定及遗传 多样性分析［Ｊ］．西北农业学报，２０１０，２０（２）：１５３—１５８． ［１９］Ｒｏｄｅｒ Ｍ Ｓ。Ｋｏｓｒｕｎ Ｖ．Ｗｅｎｄｅｈａｋｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ａ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｐ ｏｆ ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９８，１４９：２００７—２０２３． ［２０］骆蒙，贾继增．植物基因组表达序列标签（ＥＳＴ）计划研究进 展［Ｊ］．生物化学与生物物理进展，２００１，２８（４）：４９４—４９７． ［２１］Ｇｕｐｔ Ａ Ｐ Ｋ，Ｒｕｓｔｇｉ Ｓ，Ｓｈ￣，－ｍａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｒｎａｓｆｅｒａｂｌｅ ＥＳＴ— ＳＳＲ ｍｓ．ｒｋｅｓｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｎａｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｂｒｅａｄ ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２ＯＯ３， ２７０（４）：３１５—３２３． ［２２］Ｃｈｅｎ ｃ，Ｚｈｏｕ Ｐ，Ｃｈｏｉ Ｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｍｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｉｒｚｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ ｆｒｏｍ ｃｉｔｒｕｓ ＥＳＴｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ ｅＧｎｅｔｉｃｓ，２ＯＯ６，１１２：１２４８—１２５７． ［２３］王西成，姜淑苓，上官凌飞，等．梨ＥＳＴ—ＳＳＲ标记的开发及其 在梨品种遗传多样性分析中的应用评价［Ｊ］．中国农业科学， ２０１０，２４：５０７９—５０８７． ［２４］上官凌飞，李晓颖，宁宁，等．杏ＥＳＴ—ＳＳＲ标记的开发［Ｊ］．园 艺学报，０２１１（１）：４３—４４． ［２５］姚利华，滕元文．ＥＳＴ—ＳＳＲ标记及其在果树研究中的应用 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