(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 111848742 A(43)申请公布日 2020.10.30
(21)申请号 202010717326.1(22)申请日 2020.07.23
(71)申请人 南京医科大学
地址 211166 江苏省南京市江宁区龙眠大
道101号(72)发明人 贲晶晶 刘庆玲 潘君璐 李燕霞
王冬冬 刘雨莹 杨青 柏惠 陈琪 (74)专利代理机构 南京经纬专利商标代理有限
公司 32200
代理人 唐循文(51)Int.Cl.
C07K 14/00(2006.01)C12N 15/11(2006.01)A61K 38/16(2006.01)
(54)发明名称
一种多肽及其制药用途(57)摘要
一种多肽及其制药用途，属于动脉粥样硬化治疗领域，所述氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，通过在体实验可以看出：将过表达AIP60的骨髓细胞通过尾静脉注射入小鼠体内，休息4周，动脉粥样硬化造模14周，收取小鼠的血浆和组织标本，分析动物表型。实验结果显示，AIP60可减轻小鼠主动脉和主动脉根部的斑块面积，减少血浆中pro‑MMP9/TNF‑a/MCP‑1的分泌。这些结果表明AIP60可作为一种新的抗炎多肽对动脉粥样硬化病变发挥保护性作用。
A61P 9/10(2006.01)A61P 29/00(2006.01)
权利要求书1页 说明书3页序列表1页 附图4页
CN 111848742 ACN 111848742 A
权 利 要 求 书
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1.一种多肽，其特征在于所述氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述多肽对应的核酸，其特征在于所述核酸的序列如SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1所述多肽在制备抗炎药物中的应用。
4.权利要求1所述多肽在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用。5.一种抗炎药物，其特征在于有效成分为权利要求1所述的多肽。6.防治动脉粥样硬化药物，其特征在于有效成分为权利要求1所述的多肽。
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CN 111848742 A
说 明 书一种多肽及其制药用途
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[0001]
技术领域
[0002]本发明属于动脉粥样硬化治疗领域，具体涉及一种具有抗炎活性的多肽及其在动脉粥样硬化防治方面的应用。
[0003]
背景技术
[0004]心血管疾病是危害国民健康的重大疾病，动脉粥样硬化是其重要的病理生理学基础，血管内膜附着斑块的破裂和继发血栓的形成阻塞血液循环，直接导致临床心血管事件。动脉粥样硬化病变是多因素共同作用的结果，包括遗传和环境因素，如吸烟、不合理膳食、高血压、糖尿病、血脂异常等。现今临床治疗手段主要包括生活方式的改善（如戒烟、合理膳食等）、药物治疗（如他汀类药物、PCSK9抑制剂等）、介入治疗（如球囊血管成形术等）和外科手术治疗（如冠状动脉搭桥术等）。这些治疗手段极大地缓解心血管疾病的进展，但仍然存在很大的局限性。在抗炎治疗方面，临床研究中通过靶向干预炎症通路中的关键分子和炎症因子等手段治疗心血管疾病，已取得初步的进展。抑制TNF信号通路的英夫利昔单抗、阿达木单抗等虽能减少急性心血管事件的发生，但同时引起严重的副作用。靶向IL-1的卡纳单抗虽然能够减少不良心血管事件的发生，但仍存在许多问题有待进一步解决。因此，寻找动脉粥样硬化病变过程中更为有效的炎症干预策略已经成为迫切需要解决的问题。[0005]近年来研究认为，动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，动脉壁富含胆固醇的巨噬细胞积聚引起脂代谢紊乱和固有免疫的激活。动脉粥样斑块内巨噬细胞处于动态平衡的状态，巨噬细胞的数目和炎症表型影响斑块的最终命运。因此，靶向调控巨噬细胞炎症反应，是动脉粥样硬化病变防治研究的重要策略。
[0006]
发明内容
[0007]解决的技术问题：本发明提供一种多肽及其制药用途，可用于拮抗炎症及动脉粥样硬化病变。
[0008]技术方案：一种多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。[0009]所述多肽对应的核酸，核酸序列如SEQ ID NO.2所示。[0010]上述多肽在制备抗炎药物中的应用。
[0011]上述多肽在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用。[0012]一种抗炎药物，有效成分为上述多肽。[0013]防治动脉粥样硬化药物，有效成分为上述多肽。[0014]有益效果：通过离体实验可以看出：用LPS处理过表达多肽AIP60（anti-inflammatory peptide 60）的RAW264.7细胞，ELISA实验检测pro-MMP9/TNF-a/MCP-1的表达。实验结果显示，AIP60可减少pro-MMP9/TNF-a/MCP-1的分泌。通过在体实验可以看出：将
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说 明 书
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过表达AIP60的骨髓细胞通过尾静脉注射入小鼠体内，休息4周，动脉粥样硬化造模14周，收取小鼠的血浆和组织标本，分析动物表型。实验结果显示，AIP60可减轻小鼠主动脉和主动脉根部的斑块面积，减少血浆中pro-MMP9/TNF-a/MCP-1的分泌。这些结果表明AIP60可作为一种新的抗炎多肽对动脉粥样硬化病变发挥保护性作用。
[0015]
附图说明
[0016]图1为离体实验步骤流程图；
图2为在体实验步骤流程图；图3为ELISA实验结果图；图4为Western blot实验结果图；图5为免疫荧光实验结果图；
图6为主动脉大体油红实验结果图；
图7为主动脉根部切片苏木精-伊红染色实验结果图；图8为主动脉根部切片免疫荧光染色实验结果图；图9为ELISA实验结果图。
[0017]
具体实施方式
[0018]下面的实例可使本专业技术人员全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0019]SEQ ID NO.1：AQRLEQEARGRLERQKILDQSEAEKARKELLELEAMSMAVESTGNAKAEAESRAEAARIEGERKKRRQRRR
SEQ ID NO.2：cgtggtcggcttgagaggcagaagatcttggaccagtcagaagctgaaaaagcccgcaaggaacttttggagcttgaggcgatgagcatggctgtggagagcactggtaatgccaaggcggaggctgagtcccgggcagaggcagcgaggattgagggagaaggctctgtgctgcaggccaagctacgtaagaagcgtcgtcaacgtcgtcgt。
[0020]实施例1：
一、试剂及相关仪器设备：细胞：RAW 264.7；小鼠：C57BL/6；试剂：DMEM、1640、FBS、Penicillin/Streptomycin（PS）、Lipopolysaccharide（LPS）、IL-3、IL-6、SCF、Western blot抗体（p65/JNK）、ELISA kits（pro-MMP9/TNF-a/MCP-1）；
仪器：细胞培养箱（Thermofisher）、恒温水平摇床。[0021]二、实验步骤：
1、离体实验（1）将RAW 264.7细胞种至12孔板，每孔加入1 mL DMEM+10% FBS+1% PS，待细胞密度达到60%。
[0022]（2）弃培养基上清，每孔加入400μL DMEM+10% FBS+Lenti-AIP60。
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说 明 书
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（3）18 h后弃培养基上清，每孔加入1 mL DMEM+10% FBS+1% PS继续培养48-72 h。
[0024]（4）弃培养基上清，每孔加入400μL DMEM+0.1% FBS饥饿处理6 h。[0025]（5）LPS处理18 h，收取培养基上清用于ELISA实验。[0026]2、在体实验：
（1）将小鼠骨髓细胞种至12孔板，每孔加入400μL 1640+10% FBS+6 ng/mL IL-3+10 ng/mL IL-6+10 ng/mL SCF+Lenti-AIP60培养3 h。[0027]（2）收取细胞，1200 rpm离心5 min。[0028]（3）弃上清，1×PBS重悬细胞沉淀。[0029]（4）将细胞悬液通过尾静脉注射入受体小鼠（7 Gy辐照）体内。[0030]（5）小鼠休息4周后，建立动脉粥样硬化模型。[0031]（6）动脉粥样硬化造模14周后，收取小鼠血浆和组织标本。[0032]三、实验结果：
AIP60氨基酸序列：AQRLEQEARGRLERQKILDQSEAEKARKELLELEAMSMAVESTGNAKAEAESRAEAARIEGERKKRRQRRR。[0033]（1）图1所示：离体实验步骤流程。[0034]（2）图2所示：在体实验步骤流程。[0035]（3）图3所示： ELISA实验结果显示，AIP60减少RAW264.7巨噬细胞pro-MMP9、TNF-α和MCP-1的分泌。[0036]（4）图4所示：Western blot实验结果显示，小鼠骨髓细胞过表达AIP60。[0037]（5）图5所示：免疫荧光实验结果显示，小鼠主动脉根部斑块内过表达AIP60。[0038]（6）图6所示：主动脉大体油红实验结果显示，AIP60减少小鼠主动脉斑块面积。[0039]（7）图7所示：主动脉根部切片苏木精-伊红染色结果显示，AIP60减少小鼠主动脉根部斑块面积。[0040]（8）图8所示：主动脉根部切片免疫荧光染色结果显示，AIP60减少小鼠主动脉根部斑块内巨噬细胞数量。[0041]（9）图9所示：ELISA实验结果显示，AIP60减少小鼠血浆中pro-MMP9、TNF-α和MCP-1的分泌。
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序 列 表
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序列表<110> 南京医科大学<120> 一种多肽及其制药用途<160> 2<170> SIPOSequenceListing 1.0<210> 1<211> 71<212> PRT<213> 人工序列(Artificial Sequence)<400> 1Ala Gln Arg Leu Glu Gln Glu Ala Arg Gly Arg Leu Glu Arg Gln Lys1 5 10 15Ile Leu Asp Gln Ser Glu Ala Glu Lys Ala Arg Lys Glu Leu Leu Glu 20 25 30Leu Glu Ala Met Ser Met Ala Val Glu Ser Thr Gly Asn Ala Lys Ala 35 40 45Glu Ala Glu Ser Arg Ala Glu Ala Ala Arg Ile Glu Gly Glu Arg Lys 50 55 60Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg65 70<210> 2<211> 213<212> DNA<213> 人工序列(Artificial Sequence)<400> 2cgtggtcggc ttgagaggca gaagatcttg gaccagtcag aagctgaaaa agcccgcaag 60gaacttttgg agcttgaggc gatgagcatg gctgtggaga gcactggtaa tgccaaggcg 120gaggctgagt cccgggcaga ggcagcgagg attgagggag aaggctctgt gctgcaggcc 180aagctacgta agaagcgtcg tcaacgtcgt cgt 213
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说 明 书 附 图
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