２０１５第十七卷第一期 Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．１ 黄芩提取物多指标成分鉴定及指纹图谱的研究六 刘征辉１，２，３，魏静娜 ，赵琳琳 ，赵云平 一，马西兰 ，郭永泽４，程 奕４一 （１．天津海世达检测技术有限公司 天津３００３８１；２．天津市现代中药质量检验中心天津３００３８１； ３．南开大学药学院天津３０００７１；４．天津市农业质量标准与检测技术研究所天津３００３８１） 摘 要：目的：应用超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉 黄芩素４种活性成分及其指纹图谱同时检测的方法。方法：以ＡＣＱＵＩＴＹＴＭ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ 色谱柱（２．１ ｍｍ￣１００ ｍｍ，１．７ ｍ），乙腈一０．１％甲酸溶液梯度洗脱，流速０．２ ｍＬ・ｍｉｎ一，检测波长２７５ ｎｍ，柱温３０＇￣３。结 果：４种成分色谱显示分离度良好，经质谱得到各成分离子碎片，查阅相关文献均得以证实，并在同一色谱 条件下检测指纹图谱，结果显示相似度良好。结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于黄芩提取物的质量控制 研究。 关键词：超高效液相串联飞行时间质谱法黄芩素 黄芩提取物指纹图谱黄芩苷 汉黄芩苷黄芩素 汉 ｄｏｉ：１０．１１８４２／ｗｓｔ．２０１５．０１．０２８ 中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 黄芩（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ Ｇｅｏｒｇｉ．），别名山 茶根、土金茶根，是唇形科黄芩属的一种植物，属于 半野生半家种品种，多年生草本植物，主要分布于 黑龙江、吉林、辽宁、山东、河北、河南、山西、陕西、 甘肃、内蒙古、四川、云南等地。其干燥根可以人药 苷一种成分来评价其质量有一定片面性，本实验采 用Ｑｔｏｆ鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩 素、汉黄芩素４种活性成分，并在同一色谱条件下 检测其指纹图谱。以建立高效准确的黄芩提取物的 质量控制标准，也为相关制剂质量标准的提高提供 参考依据。 １仪器与试药 美 国Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ 。‘ ＵＰＬＣ／Ｑ—Ｔｏｆ Ｐｒｅｍｉｅｒ 超高效液相串联飞行时间质谱仪，配备ＭａｓｓＬｙｎｘ Ｖ４．１工作站、ＰＤＡ检测器；ＭＥＴＴＬＥＲ十万分之一 电子天平（ＤＵ ＸＳ ２０５）。 对照品黄芩苷（１ １０７１５—２０１２０４）、汉黄芩苷 （１１１５１４—２００４０３）、黄芩素（１１１５９５—２００６０４）、 汉黄芩素（１ １ １５１４—２００８０３）均购于中国药品生 物制品鉴定所，经ＨＰＬＣ峰面积归一化法测定纯 为中药黄芩，据《中国药典》记载黄芩味苦性寒，有 泻火解毒、清热燥湿、抗炎镇痛、止血安胎等功能， 对暑温胸闷呕吐、肺热咳嗽、血热妄行、高热烦渴、 湿热下痢等有良好功效。黄芩中有效成分为黄酮类 成分，其中标志性成分为黄芩苷［１］。因此，黄芩提取 物大多选取黄芩苷为提取目标，优化提取工艺制备 得到其粗品。 黄芩提取物是黄芩经加水煎煮所得粉末状干 燥浸膏粉。目前《中国药典》及文献对其均是采用 ＨＰＬＣ单独测定黄芩苷的含量。由于黄酮类成分在 储存或炮制过程中会相互转换 ～１，且各成分均具 有清热泻火及解毒等生物活性，药典标准单以黄芩 度均在９８％以上。乙腈为色谱纯，其余试剂均为 分析纯，水为重蒸馏水。１０批黄芩提取物（批号： ２０１３０５０８００１—２０１３０５０８０１０）由天津尖峰天然产物 收稿日期：２０１４—０６—１２ 修回日期：２０１４—０９—０３ ★ 科学技术部“十二五”国家科技支撑计划项目（２０１１ＢＡ１０７Ｂ０４）：华北地区黄芩规范化种植基地优化升级及系列产品综合开发研究，负责人：程奕。 ★★ 通讯作者：程奕，研究员，主要研究方向：农产品、土壤肥料及中药检测。 １５６［％ｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ￣Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ］ ２０１５第十七卷第一期＂ｋＶｏ１．１７ Ｎｏ．１ 汉黄芩素的色谱峰紫外吸收。其最大吸收波长分别 为２７６．７、２７３．８、２７５．３、２７４．７ ｎｍ。故设定检测波长 ２７５ ｎｍ。 提取物的质量标准，其质量控制是单独测定黄芩 苷，由于黄酮类成分在一定环境下会相互转换，药 典标准单以黄芩苷来衡量其质量有一定片面性，本 实验采取液质联用测定黄芩提取物中４种活性成 分，并在同一色谱条件下检测其指纹图谱。本方法 较药典方法更科学合理，作为黄芩提取物质量标准 的提高研究提供技术支撑。目前以黄芩提取物为原 料的中成药较多，但其质量控制标准均以黄芩苷单 一３．２流动性的选择 选择乙腈一０．１％甲酸溶液为洗脱系统，适当调 节流动相比例，使黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄 芩素４种黄酮类成分获得良好分离。当色谱条件优 化从１５ ｍｉｎ延长至２５ ｍｉｎ时并进行梯度洗脱，色 谱的分离效果有明显改善，故最后选择此方法为最 成分测定控制质量。多指标成分同时定量及指纹 终使用的流动相条件［１２－１６］。 ３．３对现有质控标准的改进 图谱的同时检测是中药质量标准提高提升研究的 主要方向，本方法正是实现了这一目标，将可以广 泛应用于这类中成药中以综合评价其质量。 《中国药典》植物油脂和提取物项下附了黄芩 １肖崇厚，杨松松，洪筱坤．中药化学．上海：上海科学技术出版社，２００４： ２７６． 物分析杂志，２００６，２６（１１）：１５９５—１５９６． １Ｏ谢东，路玫．反相高效液相色谱法同时测定双黄消炎片中黄芩苷和 盐酸小檗碱的含量．药物分析杂志，２００８，２８（５）：７８２—７８４． ２宋双红，王炳利，冯军康，等．不同加工方法对黄芩炮制品质量影响的 研究．中药材，２００６，２９（９）：８９３—８９５． １ １周玉新．中药指纹图谱研究技术．北京：化学工业出版社，２００２：６７１． ３赵胜男，李守拙．不同采收期黄芩中黄酮类成分含量比例的研究．中 国实验方剂杂志，２０１２，１８（２１）：８６—８９． １２屠鹏飞．中药材指纹图谱的建立及技术要求实例解说．中国药品标 ，２０００，１（４）：２２． ４李玉山．黄芩的化学成分及黄芩苷的提取方法．西北药学杂志，２００８， ２３（６）：４１０—４１ １． １３冯波，施春玲，郝乘仪，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定芎菊上清丸中黄芩苷的含 量．中草药，２００９，４０（５）：７４３—７４６． ５国家药典委员会．中国药典（一部）．北京：中国医药科技出版社，２０１０： ３９１． １４李炜，杨飞快，朱清风，等．心脑舒通胶囊中总黄酮醇苷的含量测定．西 北药学杂志，２００９，２４（１）：１０—１ １． １５王西彬，陈畅，何希荣．ＲＰ—ＨＰＬＣ测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱 的含量．中国实验方剂学杂志，２０１２，１８（１３）：１２８—１３１． ６宋承富，叶萍．黄芩提取物工艺研究．中华中医药学刊，２０１１， ２９（３）：６４１－６４４． ７肖蓉，袁志芳，王春英，等．不同产地黄芩药材ＨＰＬＣ指纹图谱的研究． 中草药，２００５，３６（５）：７４３—７４７． ８宋双红，张媛．黄芩药材ＨＰＬＣ指纹图谱的研究．中国药学杂志，２００６， ４１（６）：４１３－４１７． １６金高娃，章飞芳，薛兴亚，等．超高效液相色谱在复杂体系中药分离分 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Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｅｘｔｒａｃｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ．Ｔｈｅ ＡＣＱＵＩＴＹ 。 ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２．１ ｍｍ×１Ｏ０ ｍｍ，１．７ ｐ．ｍ）ｗａｓ ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一０．１％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ０．２ ｍＬ‘ｍｉｎ～．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２７５ ｎｍ．Ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３０￣Ｃ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ４ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ａ ｇｏｏｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ． Ｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｅａｃｈ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｇｏｏｄ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ．Ｉｔ ｗａｓ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ．Ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｅｘｔｒａｃｔ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｕｌｔｒａ～ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒ０ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｅｘｔｒａｃｔ，ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ，ｂａｉｃａｌｉｎ，ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ，ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｗｏｇｏｎｉｎ （责任编辑：李沙沙 张志华，责任译审：王 晶） （Ｗｏｒｌｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ￣Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ］１６１