抗性单克隆lgG1抗体是什么?
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发布时间:2022-04-21 18:54
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时间:2023-10-09 17:03
以诱导表达纯化后的猪P D-1胞外区蛋白为免疫原,有效地激发小鼠机体对靶分子的特异性免疫应答。运用E L l S A方法对杂交瘤进行筛选,筛选出的上清液为阳性的生长孔内常会有两个以上的杂交瘤细胞集落,有的集落可能不分泌抗体,或分泌的不是所需抗体,因此,要利用克隆培养方法及时将其分开,最常用的杂交瘤克隆培养法是有限稀释法和软琼脂培养法。本发明中采用有限稀释法对杂交瘤细胞进行克隆培养,最终获得1株可稳定分泌鼠抗猪P D-1的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其单抗为l g G1类免疫球蛋白,非其他亚型;且该株单抗具有良好的效价。通过E L l S A试验鉴定,结果呈阳性反应,初步证明该株单抗是P D-1胞外区蛋白的,再用交叉试验证明该株单抗与p E T32a载体蛋白和无关蛋白无交叉反应,进一步证明所筛出的杂交瘤是特异的,用W e s t e r n-b l o t鉴定阳性杂交瘤分泌单克隆抗体与重组蛋白发生特异性反应,最后用流式细胞术检测证实杂交瘤分泌单克隆抗体可以与外周血单核细胞(P B M C)上P D-1蛋白有效结合