人肝窦内皮细胞的复苏与传代及冻存操作说明!
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发布时间：2天前
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时间：2天前
人肝窦内皮细胞（LSEC）是一种取自女性供体的细胞，其细胞数量为每T25培养瓶1x10^6，保存温度分别为37℃和-198℃，运输方式为常温保温或干冰运输，安全等级为1级，仅限科研1类使用。该细胞的复苏与传代及冻存操作需严格遵循以下指南。
### 细胞复苏操作说明
1. **接收细胞**：收到细胞后，静置3小时，确保细胞稳定。当日更换新鲜培养基，原瓶培养基不得使用。细胞订单用户需确认订单内容。
2. **培养基与血清**：使用DMEM高糖+10%FBS+1%双抗作为培养基，胎牛血清需与供应商一致，否则可能产生售后问题。培养基pH值应为7.2-7.4，颜色微红偏黄，若有偏差需更换。
### 细胞冻存操作说明
1. **接收冻存细胞**：收到细胞后，当天存入-80℃冰箱或-196℃液氮罐中。冻存细胞的售后保障期为收到细胞后的14天内。
2. **冻存材料**：使用DMEM培养基、胎牛血清、三抗等材料，确保冻存过程安全有效。
### 常见问题与解决方案
1. **细胞脱落**：运输过程中晃动导致的细胞脱落属正常现象，静置后观察。
2. **细胞漂浮**：传代前密度过大或消化过度，移液力道过大均可能引起漂浮现象。
3. **复苏后贴壁性不好**：尝试换液并提高血清浓度至15%，观察效果。若效果不佳，联系销售及技术老师。
4. **细胞污染**：本产品内有支原体抗污染剂及三抗。若发现细胞污染，2天内立即联系销售补发；3-14天内，需核实详情后处理。
### 细胞复苏与传代操作步骤
#### 细胞复苏操作
从液氮中取出冻存管，浸入37℃温水中融化。
取出冻存管，打开盖子，使用移液吸出细胞悬液，加入离心管，混匀后加入5倍以上完全培养基。
操作离心，转速1000转/分，时长10分钟。
弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，加入5-6ml完全培养基，接种于T25培养瓶中，置于37℃培养箱培养。
次日更换培养液，继续培养。
#### 细胞传代操作
当细胞生长至80%愈合度时，准备传代。
吸出完全培养基，PBS缓冲液轻冲3遍，加入0.25%含EDTA胰酶2ml，消化2min，用完全培养基冲洗细胞，离心10min，弃上清收集细胞，分配至2个T25培养瓶，各添加7ml完全培养基。
注意，消化时间不宜过长，消化前血清成分需去除干净，终止消化时使用新鲜完全培养基。
### 细胞冻存操作
取出待冻存的细胞，使用0.25EDTA胰酶消化2min，用完全培养基冲洗，离心10min，弃上清收集细胞。
加入1ml冻存液（90%FBS+10%DMSO），制成细胞悬液。
将细胞悬液分装入3支冻存管，存放30min后，转-20℃1.5-2小时，再转-70℃4-12小时后，转移至液氮内(-196℃)。
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